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2016 Fiscal Year Research-status Report

高エネルギーリン酸化合物が引き起こすゲノム不安定性に関する研究

Research Project

Project/Area Number 16K16195
Research InstitutionChiba University

Principal Investigator

佐々 彰  千葉大学, 大学院理学研究科, 特任助教 (10738347)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2019-03-31
Keywordsゲノム / DNA損傷 / リボヌクレオチド / DNA修復 / 酵素 / 突然変異
Outline of Annual Research Achievements

ATPやGTPなどの高エネルギーリン酸化合物(リボヌクレオチド、NTP)は、エネルギー産生の基質やRNA前駆体として必須である一方で、DNA複製中にDNA前駆体と間違われてゲノムに取り込まれることがある。さらにNTPの代表的な損傷体である8-oxo-GTPのDNAへの取り込みはゲノムを崩壊させ、重篤な疾患の引き金になり得る。本研究の目的は、NTPがDNAに取り込まれた際の突然変異誘発機構、及び修復メカニズムを明らかにすることである。
本研究計画では、次の3点に着目して実験を進める。①DNAに取り込まれたGTPや8-oxo-GTP、すなわちDNA中のリボグアノシン(rG)及び8オキソリボグアノシン(8-oxo-rG)が引き起こすDNA複製エラー、②rG及び8-oxo-rGの修復機構、③ヒト細胞内でのrG及び8-oxo-rGの突然変異誘発能。
本年度は、上記計画の①について、rGまたは8-oxo-rGを含むDNAを鋳型とした場合の、ヒトDNAポリメラーゼ(Pol)であるPol α、Pol κ及びPol ηによるDNA合成反応を解析した。その結果、Pol αは鋳型上のrGを効率よく乗り越えてDNA合成を行ったが、Pol αのDNA合成活性は8-oxo-rGによって強く阻害された。Pol κは、rG及び8-oxo-rGの手前で強くDNA合成を停止した。一方、Polηはどちらのリボヌクレオチドも非常に効率よく乗り越えてDNAの合成を行った。8-oxo-rGを乗り越える際に、Pol αは8-oxo-rGの向かい側に誤ったヌクレオチドであるdAMPを取り込んだのに対して、Pol κ及びPol ηは正しいヌクレオチドであるdCMPを取り込む傾向にあった。このことから、特にPol ηは8-oxo-rGを効率よく、かつ複製エラーを起こすことなく乗り越えてDNA合成を行うことが示唆された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ほぼ計画通りに、in vitroにおけるDNA中のrG及び8-oxo-rGが引き起こすDNA複製エラーについて解析を行うことができた。

Strategy for Future Research Activity

精製したDNA修復タンパク質を用いて、in vitroにおけるDNA中のrG及び8-oxo-rGの修復メカニズムの解析を行う。また、細胞内におけるリボヌクレオチドの突然変異誘発能及び修復機構の解析を行うために、ヒトBリンパ芽球細胞において、CRISPR/Cas9システムを用いてリボヌクレオチドの修復に関与すると予想される遺伝子のノックアウトを試みる。

Causes of Carryover

予定していた国際学会への参加を見送ったことで、残額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

酵素活性測定のための生化学実験試薬、及び細胞培養関連試薬の購入に使用する。また、本研究の推進において新たな知見を得るために、国内及び国際会議に参加する。

  • Research Products

    (9 results)

All 2017 2016 Other

All Int'l Joint Research (1 results) Journal Article (3 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 2 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (5 results)

  • [Int'l Joint Research] NIEHS, NIH(米国)

    • Country Name
      U.S.A.
    • Counterpart Institution
      NIEHS, NIH
  • [Journal Article] DNA polymerase kappa protects human cells against MMC-induced genotoxicity through error-free translesion DNA synthesis2017

    • Author(s)
      Kanemaru Y, Suzuki T, Sassa A, Matsumoto K, Adachi N, Honma M, Numazawa S, Nohmi T.
    • Journal Title

      Genes and Environment

      Volume: 39 Pages: 6

    • DOI

      10.1186/s41021-016-0067-3

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Impact of Ribonucleotide Backbone on Translesion Synthesis and Repair of 7,8-Dihydro-8-oxoguanine2016

    • Author(s)
      Sassa A, Caglayan M, Beard WA, Wilson SH, Nohmi T, Honma M, Yasui M.
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 291 Pages: 24314-24323

    • DOI

      10.1074/jbc.M116.738732

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Mutagenic consequences of cytosine alterations site-specifically embedded in the human genome2016

    • Author(s)
      Sassa A, Kanemaru Y, Kamoshita N, Honma M, Yasui M.
    • Journal Title

      Genes and Environment

      Volume: 38 Pages: 17

    • DOI

      10.1186/s41021-016-0045-9

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] DNA中の酸化リボヌクレオチドにおける損傷乗り越えDNA合成と修復2016

    • Author(s)
      佐々 彰,Melike Caglayan, William A. Beard, Samuel H. Wilson, 能美 健彦, 本間 正充, 安井 学
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県・横浜市)
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] DNA中の酸化リボヌクレオチドがDNA複製及び修復機構に及ぼす影響2016

    • Author(s)
      佐々 彰,Melike Caglayan, William A. Beard, Samuel H. Wilson, 能美 健彦, 本間 正充, 安井 学
    • Organizer
      日本環境変異原学会第45回大会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場(茨城県・つくば市)
    • Year and Date
      2016-11-17 – 2016-11-18
  • [Presentation] 8oxoG付加数の異なるDNAに対する修復タンパクhOGG1の高速化量子分子動力学法による親和性評価2016

    • Author(s)
      鈴木 愛, Patrick Bonnaud, 佐々 彰, 安井 学, 宮本 明, 本間正充
    • Organizer
      日本環境変異原学会第45回大会
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場(茨城県・つくば市)
    • Year and Date
      2016-11-17 – 2016-11-18
  • [Presentation] Theoretical Comparison of the Conformational Affinity between hOGG1 DNA Repair Protein and DNA holding different Numbers of 8-oxoG2016

    • Author(s)
      Ai Suzuki, Patrick Bonnaud, Akira Sassa, Manabu Yasui, Akira Miyamoto, Masamitsu Honma
    • Organizer
      Chem-Bio Informatics Annual Meeting 2016
    • Place of Presentation
      タワーホール船堀(東京都・江戸川区)
    • Year and Date
      2016-10-25 – 2016-10-27
  • [Presentation] DNA中の酸化リボヌクレオチドに対する損傷乗り越えDNA合成機構2016

    • Author(s)
      佐々 彰
    • Organizer
      変異機構研究会第29回夏の学校
    • Place of Presentation
      あうる京北(京都府・京都市)
    • Year and Date
      2016-09-10 – 2016-09-11

URL: 

Published: 2018-01-16   Modified: 2022-02-16  

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