2018 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of neural basis of mate-guarding behavior using medaka fish.
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16K18369
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
横井 佐織 北海道大学, 薬学研究院, 助教 (10772048)
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2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 配偶者防衛行動 / 不安定化ドメイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に作製中であったイソトシン受容体2変異体を完成させ、配偶者防衛行動の試験を行った。結果、当該変異体オスは正常オスと同程度の優位性を示し、配偶者防衛行動における異常は検出されなかった。よって、メダカにおいて配偶者防衛行動はイソトシン受容体2ではなく、イソトシン受容体1の活性化を介して誘起されることが明らかになった。
また、イソトシン受容体1のプロモーター下流にDD(Destabilizing Domain:不安定化ドメイン)とTeTX:CFP(神経興奮抑制に働く、テタヌストキシンと蛍光タンパク質を融合させたもの)を融合させたタンパク質を発現させるメダカの作製を行い、系統の確立に成功した。当該個体を用いることで、低分子化合物であるTMP(トリメトプリム)の存在下においてのみ、イソトシン受容体1が発現する神経細胞の興奮を抑制させ、かつその神経をラベルすることができるようになった。
さらに、イソトシン受容体1の脳における発現パターンをin situ hybridizationにより明らかにすることが難しかったため、当該遺伝子座に蛍光タンパク質をノックインしたメダカを作出し、タンパク質レベルで発現解析をすることを可能とした。従来の遺伝子組換えを行わない個体を用いた抗体染色では、標的遺伝子と似た構造を持つ遺伝子(今回の場合ではイソトシン受容体2)も同時に染色してしまう可能性が高かかったが、本手法によりイソトシン受容体1が発現する神経のみを可視化した。
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