2017 Fiscal Year Research-status Report
肝傷害誘導モデルマウスを用いたin vivoにける肝臓分化誘導法の確立
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16K18403
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| Research Institution | Central Institute for Experimental Animals |
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Principal Investigator |
樋口 裕一郎 公益財団法人実験動物中央研究所, 実験動物研究部, 研究員 (00596281)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | Afp-TKマウス / 胎仔肝 / Ｅｘ ｕｔｅｒｏ法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウスαフェトプロテイン（Ａｆｐ）プロモーター配列にＨＳＶｔｋ遺伝子をつなげたＴｇを構築し、新規肝臓形成不全マウス（Ａｆｐ－ＴＫマウス）を作製した。マウスゲノムへのＴｇ挿入及び次世代へのＴｇ伝達を３ラインで確認し、この３ラインについて、胎仔肝臓におけるＨＳＶｔｋ遺伝子の発現量を定量的ＲＴ－ＰＣＲによって解析した。結果、３ライン中２ラインが、ＴＫ－ＮＯＧマウス成体肝臓におけるＨＳＶｔｋ遺伝子の発現量と比較して、６割程度の発現量を示すことを確認した。そこでこの２ラインについて、妊娠中の母体にＧＣＶを投与し、胎仔肝臓の形成不全を誘導できるか検証を行なった。胎生９．５日目の母体に１００ｍｇ／ｋｇＢＷでＧＣＶを腹腔内投与し、胎生１２．５日目にサクリファイスしたところ、いずれのラインでも肝臓の形成不全を示す胎仔を確認した。ジェノタイピグの結果、肝臓形成不全を示した胎仔はいずれもＴｇ個体であり、特に一方のライン（Ｓ１２）では雌雄に関係なく、安定して肝臓の形成不全を誘導できることを確認した。しかしながら、肝臓形成不全を誘導したＴｇ胚は出生に至らず、胎生致死となることも確認された。これは肝臓の消失とともに、Ａｆｐを発現する胚体外組織（特に羊膜）への障害が原因であるものと推測された。そこでＧＣＶの投与量と投与のタイミングについて詳細な検討を行い、胎生１２．５日目に５０ｍｇ／ｋｇＢＷでＧＣＶを腹腔内投与することにより、胎仔肝の肝芽細胞に障害を誘導した上で、胎生致死を回避できることを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究課題の鍵となる胎仔肝臓の形成不全を薬剤投与依存的に誘導できるマウスの開発に成功した。
今後はこのマウスを用いたｉｎ ｖｉｖｏ分化誘導系の検証試験を進めていく。
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| Strategy for Future Research Activity |
胎仔肝形成不全を誘導した胎仔肝臓の補完を行う方法として、当初は胚盤胞補完を計画していた。この計画を変更し、胎生期の肝臓に細胞を移植することで補完を行えるか検証を進める。胎仔肝臓に細胞を移植するため、子宮外発生法（Ｅｘ ｕｔｅｒｏ法）の技術を導入する。その上で、まずマウス胎仔肝より単離した肝芽細胞を、胎仔肝形成不全を誘導したＡｆｐ－ＴＫマウス胎仔に移植し、胎仔肝臓の補完を行えるか検証実験を行う。その結果を判断し、マウスやヒトのｉＰＳ細胞より作製した肝芽細胞による胎仔肝臓の補完の可能性について検討する。
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| Causes of Carryover |
（理由）
必要物品の購入を行なった際に余剰金が発生した。
（使用計画）
消耗品の購入に充てる。
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