2018 Fiscal Year Annual Research Report
Structure and functional analyses of novel prenyltransferase to produce novel compounds.
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16K18501
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
松井 崇 東北大学, 生命科学研究科, 助教 (30463582)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | プレニル基転移酵素 / LC-MS |
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| Outline of Annual Research Achievements |
プレニル基転移酵素（PT）によって修飾された天然化合物は母骨格化合物にはない強力な生物活性を示すものがある。PTのうち、インドールへプレニル基を修飾可能なプレニル基転移酵素（IPT）は、非天然化合物の生合成研究や結晶構造解析が進められているものの、IPTによる効率的な物質生産へは応用できていない。そこで、本研究では、IPTの中でもこれまで構造解析がされておらず、またその機能についても詳細が不明であった新規IPTの立体構造や基質・酵素反応生成物を同定する。さらに、既知IPTと比較することで基質特異性を発揮する構造要素を解明し、効率的に有益物質を生産可能な変異型IPTの創出を目指す。本目的を達成するために、平成29年度までの問題点であった精製試料の不安定性を解消するため、平成30年度では、タンパク質の安定性を向上させるためのコンストラクトの作成と試料調製法を確立した。さらに、この確立した調製方法を用いて、IPTの基質特異性の解析をLC-MSを用いて実施した。
タグの種類やTEVプロテアーゼ等による精製後のタグ切断、HisタグをN末端からC末端へと付け替えることで、タンパク質の凝集を抑えることに成功し、4℃で数日安定な試料を調整することに成功した。
さらに、安定な試料を用いてIPTの基質特異性をLC-MSを用いて確認した。昨年度までは、試料の安定性に問題があったために反応生成物の生成量は非常に微量であったが、安定な資料を用いた結果、昨年までに確認できていたインドールを基質とした反応生成物以外にも、トリプタミンのインドール環に対しても、本IPTはファルネシル基を付加できIPTであることを明らかにし、現在は、いくつかのTrp含有ポリペプチドに対する活性測定を行っている。
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Research Products
(7 results)
