2018 Fiscal Year Annual Research Report
Regulation mechanisms of novel cytokine production by metal trace elements
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16K18518
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
和田 俊樹 (矢部俊樹) 金沢医科大学, 医学部, 講師 (10451634)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | サイトカイン / 蛋白質輸送 / 膜蛋白質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Toll-like receptor（TLR）は，病原体由来の共通パターン分子（PAMPs）を認識するパターン認識受容体として自然免疫系において重要な役割を担う．これまで，TLRによる炎症性サイトカイン遺伝子の発現機構の研究は精力的に行われてきたが，サイトカイン蛋白質の分泌制御に関しては不明な点が多く残されている．本研究では，IFN-αの細胞外への分泌を担うキャリア分子として同定したSortilinのサイトカインキャリア分子としての機能の詳細及びその発現制御機構を明らかにする．
本年は，昨年度行ったSPR解析による物理学的相互作用の解析から同定されたSortilin新規リガンドの解析を進めた．Sortilinが同定した新規リガンドの輸送に関与するかを検討するため，Sortilinの全身KOマウス及びfloxマウスを導入し，新規リガンドを発現する細胞特異的にSortilinをKOすることを試みた．しかしながら，全身KOマウス及びコンディショナルKOマウス共に作出に時間がかかり，実験へ供与可能なマウスを得ることが出来なかった．引き続きマウスの作製を行い，細胞レベル及び個体レベルでのSortilinと新規リガンドの機能相関に関する解析を行っている．
また，昨年から引き続きSortilin組換蛋白質の結晶化に取り組み，リガンド非結合型Sortilinの結晶化と構造決定に成功した．興味深いことに，SortilinはpHに依存して2量体化していた．そこで，この2量体化に関与すると思われるアミノ酸残基の変異体を作製し解析したところIFN-α輸送活性へ影響を与えたことから，SortilinのpHに依存した2量体化はIFN-α輸送活性に重要であることが明らかとなった．また，Sortilinの新規リガンドを発現する動物細胞株の樹立も行い，予備的精製を行った．現在，大量精製系の構築を行っている．
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