2016 Fiscal Year Research-status Report
Mibによるp120ctnのユビキチン化を介した細胞集団移動制御機構の解明
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16K18547
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
溝口 貴正 千葉大学, 大学院薬学研究院, 助教 (10645419)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | Mib1 / p120ctn / ユビキチン化 / 細胞移動 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
E3ユビキチンライゲースであるMind bomb1(Mib1)はNotchシグナルの正の制御因子としてよく知られているが、申請者はMib1の新たな基質としてp120ctnを同定した。p120ctnは細胞移動に関わるRac1の活性化を促進することから、Mib1はp120ctnのユビキチン化を介して、細胞移動に関わるものと考えられる。これまでの解析からMib1はp120ctnのK547, K569, K574のいずれかまたは複数個所をユビキチン化しているものと推察された。そこで各々のリジンをアラニンに置換した変異型のp120ctnを作製し、ユビキチン化を検討したところ、K547がMib1によるユビキチン化部位であることが明らかとなった。またK547のユビキチン化依存的にp120ctnの機能が制御されていることも明らかとなった。次に側線原基の移動においてp120ctnの機能解析を行った。mib1変異体で側線原基の移動が観察されるが、この表現型がMib1によるp120ctnの機能抑制の損失に起因したp120ctnの機能亢進によるものであると考え、p120ctnの機能抑制実験を行った。その結果、モルフォリノアンチセンスオリゴを用いてp120ctnの発現を抑制すると、側線原基の移動が部分的に回復することが明らかとなった。このことからMib1によるp120ctnの機能制御がゼブラフィッシュの側線原基の移動制御に貢献していることが示された。以上の結果は現在論文投稿準備中である。また側線原基の移動を観察するにあたり作製したゼブラフィッシュトランスジェニックライン、Tg(UAS:Lideact-mCherry), Tg(UAS:Lifeact-EGFP), Tg(UAS:EB1-mCherry)は新規のトランスジェニックラインとしてgenesis 54(9) 483-489にて報告した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請書に掲げた研究計画通りに研究が遂行できた。また研究成果の一部は論文発表を行った。以上のことから、おおむね順調に進展しているといえる。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの成果をまとめて論文を執筆中であるので、論文投稿を行う。また投稿時にレフリーより、指摘点があればそれに応じた追加実験を遂行する。
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| Causes of Carryover |
実験スケール等の見直しにより、分子生物学試薬(酵素、抗体）の消費が抑えられたため、またプラスチック製品をより安価な製品に切り替えたり、再利用に努めたため。また参加を予定していた熊本で開催予定であった発生学会が地震の影響で中止となったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
保有していない酵素や抗体等の分子生物学的試薬や実験器具類の購入に使用する。
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