2017 Fiscal Year Research-status Report
円口類ヌタウナギ、ヤツメウナギ半規管の進化発生学的解析
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16K18594
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
菅原 文昭 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (00611005)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 半規管 / Otx1 / ヤツメウナギ / ヌタウナギ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Otx1ノックアウトマウスは水平半規管を欠くため、Otx1およびその下流の遺伝子ネットワークは、水平半規管の発生に必須である可能性が高い。そこで、マウスOtx1ノックアウトマウスを作成し、その胚から内耳を取り出しRNAを抽出した。つぎに野生型との遺伝子発現プロフィールを比較するため、マイクロアレイ解析を行った。結果は現在解析中である。
ヤツメウナギ内耳において、Otx遺伝子が発現しているかを検証するため、さまざまなステージの胚、およびアンモシーテス幼生から内耳を摘出し、RNAを抽出した。次にそれを逆転写したcDNAをテンプレートとしてリアルタイムPCRを行った。その結果、ヤツメウナギ発生後期～アンモシーテス幼生期にかけて、Otx相同遺伝子であるLjOtxA, LjOtB, LjOtxC, LjOtxDのすべての発現が認められることが分かった。この結果は、「ヤツメウナギではOtx遺伝子が内耳で発現していないから水平半規管がない」とするこれまでの仮説を覆すものであり、非常に重要な知見である。現在は詳細な発現領域を解析するために、in situハイブリダイゼーション法を行っている。
また、半規管のドーナツ状の環の形成の際、発生時にNetrin1が、耳胞の将来孔のあく領域に発現することが知られている。この遺伝子が円口類でどのように働くのか調べるため、ヤツメウナギ、ヌタウナギからNetrin1相同遺伝子をクローニングした。現在は発現領域を解析中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
マイクロアレイ解析を行ったが、まだその結果についての確認実験、および考察は行っていない。
ヤツメウナギOtx遺伝子の発現をリアルタイムPCRで確認できたことは進歩である。発現領域の解析であるin situハイブリダイゼーション法の解析を急ぎたい。
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| Strategy for Future Research Activity |
上記のように、マイクロアレイ解析から見えてくる、Otx1とその有無により発現変動する遺伝子群の確認と、半規管の発生との関連をさらに解析する必要がある。受託解析の利用も含め、効率よく解析を進めていきたい。
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| Causes of Carryover |
極めて少額であり、計画通り使用てきている。
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