2017 Fiscal Year Research-status Report
ウイルスベクターを用いたサクラ属果樹の遺伝子機能評価系の開発およびその園芸的利用
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16K18651
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
河井 崇 岡山大学, 環境生命科学研究科, 助教 (90721134)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 果樹 / サクラ属 / ウイルスベクター / ジーンサイレンシング / 遺伝子機能評価 / 早期開花誘導 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
主要果樹種を多く含むバラ科サクラ属果樹では，早くから重要な園芸形質に関する遺伝子研究が精力的に進められてきた．しかしながら，遺伝子の機能を実証する有効な手法が確立されていないため，得られた成果を果樹栽培・育種に十分に活用できていないのが現状である．そこで本研究では，サクラ属果樹においてウイルスベクターを用いた遺伝子機能評価系を確立し，基礎研究で蓄積されたゲノム関連情報を果樹栽培・育種に有効活用することを目的とする．今年度は，昨年度に引き続き，果実生産・育種において実用性の高い花成関連遺伝子に着目し，安定したウイルスベクターの接種および早期開花誘導を実現するため，新規ベクターの開発ならびに接種源の調整法の検討を行った．
シロイヌナズナおよびウメFTの全長配列（AtFT，PmFT；発現誘導），あるいはアンズおよびウメTFL1の部分配列（ParTFL1，PmTFL1；VIGSによる発現抑制）を単独で有するALSVベクターに加えて，クローニングサイトを新規に設計し，複数遺伝子の同時発現制御が可能なベクターを開発した．これらのベクターをベンサミアーナタバコおよびキヌアに接種し，ベントナイトを用いてウイルスRNAを精製・濃縮した．リアルタイムRT-PCRによるウイルスRNAの絶対定量を行ったところ，従前の方法と比較して7.5～40倍にウイルスRNAを濃縮することに成功した．しかしながら，濃縮RNAをアーモンド，カンカオウトウ，アンズに接種したところ，明確な感染率の改善は確認できなかった．また，感染個体における早期開花誘導もみられなかった．今後は，引き続き接種源の調整法を検討するとともに，ALSVベクター以外のウイルスベクターの接種にも取り組む．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は，アーモンド，カンカオウトウ，アンズにおいて安定したウイルスベクターの接種および早期開花誘導を実現するため，新規ベクターの開発ならびに接種源の調整法の検討を行った．しかしながら，今回用いた方法では，接種効率改善・早期開花誘導の両面において明確な改善効果は得られず，当初計画していた「早期開花個体における受粉試験・後代の獲得」および「ウイルス伝播調査・既存品種への接種試験」について詳細な調査を行うことができなかった．これらの理由から，やや遅れていると評価した．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後はウイルスベクターの接種効率改善を最優先の課題として，ウイルスRNAの精製・濃縮の手順を引き続きブラッシュアップする．また，ALSVベクターに加えて，果樹類の遺伝子発現制御における有効性が報告されているTRVベクターの利用についても検討する．
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| Causes of Carryover |
新規ベクターの構築を当初計画より順調に進めることができたため，試薬類・器具類などの消耗品費やその他の解析費を低く抑えることができた．一方，当初計画での想定より接種効率が低く，早期開花誘導を利用したサクラ属果樹の世代促進技術の開発など，当年度に計画していた研究内容の一部を次年度に実施するよう計画変更したため，本年度の助成金の一部を繰り越した．
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