2018 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of novel transcriptional suppressing mechanism in canine BRCA2
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16K18817
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
吉川 泰永 北里大学, 獣医学部, 講師 (00552043)
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2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | BRCA2 / 転写抑制 / サイレンサー / シス因子 / トランス因子 / 転写抑制因子 / 転写因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
イヌ乳腺腫瘍発症の抑制遺伝子産物であるBRCA2は相同組換え修復に貢献することで細胞の腫瘍化を防いでいる。近年、BRCA2の発現量の低下が腫瘍発症と関係することが報告され始めている。これまでの研究から申請者はイヌBRCA2のイントロンに新規サイレンサー配列が存在することを見出した。平成29年度までに、イントロンの一 部(50 bp)に転写を抑制する活性があることを証明し、そのDNA配列に相互作用するタンパク質を質量分析により数種類同定した 。平成30年度においては、平成29年度に得られた結果をさらに詳しく研究した。
サイレンサー配列が存在する領域を50 bpの長さで限定し、その配列と相互作用する可能性があるタンパ ク質を6種類特定していたので、この6種類のタンパク質について機能解析を行った。まず、これらのタンパク質を強制発現または ノックダウンした細胞を作製した。これらの細胞を用いてレポーターアッセイを用いた転写抑制活性の測定や定量的PCRによるBRCA2のmRNAの発現量を調べた。この結果、5種類のタンパク質を強制発現させると転写抑制活性が増加し、1種類のタンパク質の発現量を低下させると転写抑制活性が減少することが分かった。このタンパク質のノックダウン細胞では、内因性BRCA2の発現量も低下していることも分かったので、このタンパク質が転写抑制因子として機能している可能性が示唆された。
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