2016 Fiscal Year Research-status Report
パラミクソウイルスのリーダー配列と細胞障害性の関係を探る
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16K19143
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
松本 祐介 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (00735912)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ヒトパラインフルエンザウイルス2型 / ポリメラーゼ / リーダー配列 / 複製 / 転写 / パラミクソウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
パラミクソウイルス感染病態の多くは細胞障害に起因するものであり、その分子メカニズムの解明が望まれている。本研究では、小児を中心とした呼吸器感染症を起こすヒトパラインフルエンザウイルス2型(hPIV2)を用いて、培養細胞における細胞障害機構を解析することを目的として実験を行った。
リバースジェネティクス法を用いて、hPIV2のリーダー配列の中間部分、具体的には3'末端から25-30塩基の部分に変異を加えたウイルスを作製した。この変異が入ることで、ウイルス感染における細胞死が強く誘導されることを見出した。この変異型hPIV2と野生型hPIV2感染細胞におけるウイルス由来RNAを定量した結果、変異型hPIV2では感染初期に過剰にウイルスmRNA転写が起こっていることが分かり、ウイルス蛋白質発現量バランスの乱れが細胞死の誘導に繋がっている可能性を見出した。
また、本研究課題に関連して、ウイルス増殖に携わる他のウイルス蛋白質にも着目した。様々な変異型ウイルスを作製する過程で、核酸蛋白質(NP)のRNA結合領域に変異を加えることで過剰にhPIV2のポリメラーゼ活性が増強されることを発見した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
hPIV2のリーダー配列の変異によって細胞傷害が起こるメカニズムはウイルス蛋白質の発現バランスによってもたらされることが明らかになった。また、hPIV2の核酸蛋白質にわずかな変異を加えることでポリメラーゼ活性が極端に増強されることを見出した。この変異によってパラミクソウイルスが複製するためにはゲノムの塩基数が６の倍数でなければならないrule of sixという法則までもを無視できるという重要な発見に至った。これによってウイルス複製に関する新たな知見が得られたため、本研究は順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究課題では今後も一貫してhPIV2のポリメラーゼ関連蛋白質に着目して実験を進める。これまでの研究によって得られた様々な変異型hPIV2と野生型hPIV2の違いを調べるため各ウイルス感染細胞におけるウイルス由来RNAをディープシークエンスによって網羅的に調べることを計画している。
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| Causes of Carryover |
研究用試薬購入の際、端数が出たため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
実験用試薬の購入にあてる。
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