唾液特異的miRNAマーカーの探索

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K19302
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 多木 崇 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (70408475)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 体液識別 / miRNA

Outline of Annual Research Achievements

本研究では未だ有効な体液識別マーカーが見出されていない唾液において、唾液エクソソーム中に含まれるmiRNAを唾液マーカーとして利用することを考えた。そして、唾液と唾液エクソソームの miRNA 発現パターンを比較し、唾液マーカーとなりうるmiRNAが存在するか調べることを目的とした。８名の健常人から提供された数mLの唾液から唾液エクソソームを精製し、唾液、唾液エクソソームからtotal RNAを抽出後、逆転写反応によりcDNAを合成した。８名分のcDNAを混合し、PCRでmiRNAを増幅した後、1008種類のmiRNA発現量をリアルタイムPCRにより測定した。その結果、1008種類のmiRNAのうち、唾液エクソソームでは748種類、唾液では955種類のmiRNAが定量できた。また、唾液に比べて唾液エクソソームで10倍以上発現していたmiRNAが36種類、唾液エクソソームに比べて唾液で10倍以上発現していたmiRNAが49種類見つかった。
これまでの実験により、比較的少量の唾液を用いて、唾液エクソソーム中のmiRNA定量を行えることが示唆された。唾液エクソソーム、唾液で発現量の異なるmiRNAの存在が示唆されたが、エクソソーム分泌量の多い唾液腺に存在する細胞と、その他の上皮細胞等でmiRNA発現プロファイルが異なっている、或いは特定のmiRNA種がエクソソームに優先的に内包され分泌される可能性が考えられた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

唾液数mLから得た唾液エクソソーム中のmiRNAは、極微量であることが予想され、定量が困難なものがある程度含まれることが予想された。しかし、リアルタイムPCRで定量を行う前に、PCRで増幅を行うことにより、測定を行ったmiRNAのうち74%のmiRNAで定量を行うことができた。

Strategy for Future Research Activity

８名分のcDNA混合サンプルから、唾液、唾液エクソソーム間で発現量に大きな差が観察されたmiRNAをスクリーニングすることが出来た。今後は発現量の大きかった個々のmiRNAに関して個人サンプルで定量を行い、ばらつき等を調べ、唾液マーカーとなりうるmiRNAを報告する予定である。