2018 Fiscal Year Annual Research Report
Predicting the treatment effect of sorafenib using new biomarker in patients with hepatocellular carcinoma
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16K19372
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
山口 隆志 関西医科大学, 医学部, 助教 (10730202)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | Smad / TGF-beta / 肝細胞癌 / 循環癌細胞 / ソラフェニブ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
切除不能な進行肝細胞癌の第一選択薬であるソラフェニブは、その治療効果が個々の患者によって大きく異なるため、早期の治療効果判定が望まれる。しかし、現在、実臨床では画像診断に頼らざるを得ないため、リアルタイムでの効果判定は不可能である。そこで、本研究では、進行肝細胞癌に対するソラフェニブ治療のリアルタイムな治療効果判定を可能にするバイオマーカーの開発を行った。初めに、ソラフェニブがリン酸化Smadシグナルに与える影響を確認するために、肝癌細胞株（Huh7,HepG2）にソラフェニブを添加する培養細胞を用いた実験を行った。ソラフェニブの細胞増殖抑制効果を反映して、リン酸化Smadを介するシグナルは癌化シグナルであるpSmad3Lが抑制され、癌抑制シグナルであるpSmad3Cが増強されること確認した。次に、患者全血から循環癌細胞（CTC）を単離する方法を検討した。autoMACS Pro Separator（型番130-092-545 ミルテニーバイオテク）を用いて、抗CD45抗体で白血球を取り除くネガティブ選択と抗EpCAM抗体を用いたポジティブ選択を組み合わせてCTCの単離を試みた。プロトコールを確立するために、健常人の全血にHuh７を加えたものを用いて、回収率を評価した。健常人の全血３ｃｃにHuh7 1000個の細胞を溶解し、autoMACS Pro Separatorを用いて抗CD45抗体によるネガティブ選択と抗EpCAM抗体によるポジティブ選択を行い、Huh7の回収率を検討した。その結果、約20％の回収率を得ることができた。上記のプロトコールを用いて、ソラフェニブの投与前の進行肝細胞癌患者の全血中からCTCの単離を試みた。残念ながら、患者血液中のCTCを回収することはできなかった。細胞のviabilityの低下により抗体反応が起こらないことが一因と考えられた。
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