2016 Fiscal Year Research-status Report
心肥大で誘導される新規lincRNAの、筋組織における核内制御と核内機能の解明
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16K19400
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
桑原 康秀 京都大学, 医学研究科, 特定助教 (60632099)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 心不全 / 長鎖非コードRNA / 心肥大 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はマウス心不全モデルを用いて、有意に転写されてくるタンパク質をコードしない新規長鎖非コードRNAを同定し、その心肥大における役割の解明を行っている。これまで何も転写産物が生じないと考えられていた遺伝子間領域から転写されてくるlong intergenic noncoding RNAであり、lincRNA-Hy5と名付けている。
二つの遺伝子の間から転写されてくるlincRNAであるため、独自のプロモーターを有することが予想された。そこで我々はプロモーターアッセイを行ったところ、心不全で重要な働きを行うSerum Response Factor（SRF)で転写活性が上昇することを見いだした。またlincRNA-Hy5の作用機序を解明するため、核内の結合タンパク質の同定を試みた。ビオチン化lincRNA-Hy5を作製し、肥大した心臓の核内タンパク質を結合させ、結合したタンパク質を質量分析で網羅的に同定したところ、非常に興味深いことに、最も特異的に結合するタンパク質は転写因子であった。またlincRNA-Hy5と、この転写因子との結合にlincRNA-Hy5のどの部位が重要であるかの同定にも成功した。
lincRNA-Hy5の生体での働きを解明するため、lincRNA-Hy5欠損マウスを作製し、その表現系を解析しているところである。８週令までの解析にとどまるが、普通に生存し、心機能も心エコー上は正常であった。ただし、心臓が少し小さい傾向にあり、また興味深いことに繊維化マーカーであるコラーゲンや、収縮タンパク質を構成するミオシン重鎖の遺伝子発現が有意に低下していた。現在はこのlincRNA-Hy5欠損マウスに圧負荷を加えることにより心不全を誘導した場合の心機能の評価を行っているところである。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
当初の予定より非常にスムーズに進行している。lincRNA-Hy5の発現を制御する転写因子の同定や、その転写因子の結合部位の同定も終了した。また核内と細胞質におけるlincRNA-Hy5結合タンパク質の同定も終了している。
またlincRNA-Hy5欠損マウスの正常状態下での表現型解析は終了しており、圧負荷における解析もほぼ終了に近い状況である。以上のことから当初予定した以上に進展していると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
lincRNA-Hy5の圧負荷下での機能解析を行うために現在圧負荷を与えたlincRNA-Hy5の心臓を用いて、クロマチン免疫沈降等の実験を行っている。これが終了すれば論文投稿可能であると考えている。
lincRNA-Hy5は、心臓と骨格筋に特異的に発現するlincRNAであるため、心臓の解析が終了すれば、骨格筋における働きの解析を行う予定である。
またlincRNA-Hy5は心臓に保護的に働いているという結果が得られつつあるため、アデノ関連ウイルス９を用いて心臓特異的に過剰発現させ、心不全が改善するかを検討予定である。
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| Causes of Carryover |
本年度には物品費用が予定よりもわずかながら少なく抑えることが可能であったため、次年度に持ち越すこととなった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は次年度使用額も合わせて、消耗品やマウス飼育代に充てる予定である。
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Research Products
(8 results)
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[Journal Article] MicroRNA-33 Controls Adaptive Fibrotic Response in the Remodeling Heart by Preserving Lipid Raft Cholesterol.2017
Author(s)
Nishiga M, Horie T, Kuwabara Y, Nagao K, Baba O, Nakao T, Nishino T, Hakuno D, Nakashima Y, Nishi H, Nakazeki F, Ide Y, Koyama S, Kimura M, Hanada R, Nakamura T, Inada T, Hasegawa K, Conway SJ, Kita T, Kimura T, Ono K.
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Journal Title
Circulation Research.
Volume: 120
Pages: 835-847
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Prevention of neointimal formation using miRNA-126-containing nanoparticle-conjugated stents in a rabbit model.2017
Author(s)
Izuhara M, Kuwabara Y, Saito N, Yamamoto E, Hakuno D, Nakashima Y, Horie T, Baba O, Nishiga M, Nakao T, Nishino T, Nakazeki F, Ide Y, Kimura M, Kimura T, Ono K.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 12
Pages: e0172798.
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] LincRNA Upregulated by Pressure Overload Induces Hypertrophy in Neonatal Mouse Cardiac Myocytes by Binding with Multiple Partners2017
Author(s)
Kuwabara Y, Horie T, Watanabe S, Nishiga M, Baba O, Nakao T, Nishino T, Hakuno D, Nakashima Y, Nakazeki F, Ide Y, Koyama S, Kimura M, Hanada R, Kimura T, Ono K.
Organizer
第81回 日本循環器学会学術集会
Place of Presentation
石川県立音楽堂、金沢
Year and Date
2017-03-17 – 2017-03-19
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