2019 Fiscal Year Annual Research Report
Ephrin-B1 at the slit diaphragm controls podocyte function
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16K19479
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
福住 好恭 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (20609242)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | ポドサイト / スリット膜 / NHERF2 / Ephrin-B1 / 蛋白尿 / Nephrin / ネフローゼ症候群 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ポドサイト特異的Ephrin-B1ノックアウトマウス単離糸球体材料を用いた次世代シーケンサ解析から足場蛋白質であるNHERF2を同定した。リアルタイムPCR、及び免疫染色法による解析で、Ephrin-B1ノックアウトマウス糸球体でNHERF2の発現低下が確認され、NHERF2はEphrin-B1の関連分子であることを示した。
これまでにNHERF2はポドサイトの頂部に局在すると報告されていた。今回、正常ラット糸球体を用いた局在解析で、NHERF2がポドサイトスリット膜に局在するEphrin-B1と共局在することが観察された。また、電子顕微鏡による解析でNHERF2はスリット膜に局在することを示した。以上の結果から、NHERF2はスリット膜にも局在することを明らかにした。
HEK293細胞を用いた強制発現系による免疫沈降解析で、Ephrin-B1はNHERF2の２つあるPDZ domainのうちPDZ domain 1で結合することを示した。また、Nephrin/Ephrin-B1/NHERF2共発現の検討で、抗Nephrin抗体刺激によりリン酸化されたEphrin-B1はNHERF2と結合しないことを明らかにした。
蛋白尿を呈するネフローゼ症候群モデルラットを用いた解析で、病態誘導初期の糸球体でNHERF2の染色性の低下、及びEphrin-B1との共局在の減少を観察した。発達期糸球体では、Ephrin-B1とNHERF2はNephrin発現がまだ観察されないS字管期初期糸球体で共発現が観察された。
以上の結果から、NHERF2は新規Ephrin-B1関連分子であり、Ephrin-B1とNHERF2の相互作用がポドサイトスリット膜の機能維持に重要であることを示した。
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