2017 Fiscal Year Research-status Report
慢性感染症の克服を目指した疲弊抵抗性CAR-T細胞の開発
| Project/Area Number |
16K19617
|
|---|
| Research Institution | Dokkyo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
布矢 純一 獨協医科大学, 医学部, 助教 (40466842)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
|
| Keywords | CAR-T細胞 / 共刺激シグナル / 疲弊 / 免疫チェックポイント / HIV |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究計画は、CAR-T細胞における免疫チェックポイント分子の発現制御を基盤として疲弊抵抗性CAR-T細胞を開発し、代表的な慢性感染症であるヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染症をモデルとして、その有用性を検討することが目的である。平成29年度はCAR-T細胞における共刺激シグナルの役割の解明するため、異なる共刺激シグナルを有するCAR-T細胞の機能および性状解析を行い、以下の結果を得た。(1) 異なる共刺激シグナル(CD28, 4-1BBまたはHVEM由来)を有するCAR-T細胞におけるCARの発現を比較したところ、細胞内および細胞表面におけるCARの発現量に差が見られた。(2) 標的抗原であるHIV Envタンパク質を発現させた細胞とCAR-T細胞の共培養系を確立し、エフェクター機能の解析を行った。細胞傷害活性およびサイトカイン産生量(IL-2, IFN-gおよびTNF-a)は、有する共刺激シグナルの種類によって異なっていた。CAR発現量とエフェクター機能(細胞傷害活性、サイトカイン産生量)の相関解析を行ったところ、CARの発現量とエフェクター機能は正の相関を示した。特にCD28を有するCAR-T細胞は、ほとんどサイトカインの産生を示さなかった。(3) PD-1およびLAG-3の発現を指標としてT細胞疲弊の解析を行った。CD28を有するCAR-T細胞は、4-1BBやHVEMを有するCAR-T細胞に比べて、疲弊した細胞の割合が有意に高いことが分かった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
作製したCAR-T細胞がHIV複製や潜伏感染の再活性化を抑制できるかを平成２９年度に明らかにする予定であったが、潜伏感染細胞株の取得や自立増殖型HIVの調整に予想以上に時間を要したため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
1. CAR-T細胞における共刺激シグナルの役割の解明。 共刺激シグナルが細胞の表現型に与える影響を解析するため、メモリー表現型(CD45RO、CCR7)をフローサイトメトリーで解析する。
2. HIV特異的CAR-T細胞の抗HIV効果の解析。 HIV感染細胞とCAR-T細胞を共培養し、HIV複製を抑制できるかを解析する。
3. 疲弊抵抗性CAR-T細胞の作製。 CAR-T細胞に疲弊抵抗因子を発現させ、疲弊抵抗性CAR-T細胞を作製する。標的細胞との共培養で産生されるサイトカインの測定や細胞傷害性の解析を行う。
|
| Causes of Carryover |
理由： HIV潜伏感染細胞株の取得や自立増殖型HIVの調整に予想以上に時間を要したため。問題点は解決しており、研究計画の遂行に問題はない。
使用計画： ベクターウイルス調整や遺伝子導入に必要な消耗品(プラスチックディッシュなど)を購入する。HIV特異的CAR-T細胞の表現型を解析するため、各種蛍光標識抗体を購入する。また、抗HIV効果の解析のため、HIV p24抗原ELISAキットや蛍光標識抗HIV p24抗体を購入する。
|
