ランゲルハンス細胞組織球症における微少残存病変評価法の確立

2018 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K19662
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 翁 由紀子 自治医科大学, 医学部, 助教 (30438650)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 血漿BRAF V600E / ランゲルハンス細胞組織球症 / 微少残存病変

Outline of Annual Research Achievements

ランゲルハンス細胞組織球症(LCH)は乳幼児に好発する腫瘍性疾患である。治療効果判定は、画像検査を行うが、定量性に欠ける。大腸がんでは、血漿のBRAF V600Eコピー数が、残存腫瘍量を反映すると言われている。そこで、LCHの60%に陽性であるBRAF V600Eを、血漿で定量できれば、簡便に腫瘍量を評価することが できると考えた。
前年度に確立した方法を用いて、ランゲルハンス細胞組織球症(LCH)患者の血漿中BRAF V600Eを定量した。
新たに20症例の血漿から、cell-free DNAを抽出し、定量PCRを行った。20症例中6例(30%)が、BRAF V600E陽性だった。
LCHでは、血漿BRAF V600E定性と腫瘍BRAF V600E定性が一致するかどうか、確認されていない。そこで腫瘍BRAF V600Eも解析する必要がある。 臨床試験(2012年-2018年)で収集した腫瘍のパラフィン切片を使用する計画であるが、切片作成から時間が経つと、DNAの劣化が起こる。そこで、6年前に作 成したLCH腫瘍のパラフィン切片から、DNAを抽出し、BRAF V600E変異特異的PCRを行う予備実験を行った。4μmの厚さの切片、3枚から、DNAを抽出した。3症例 で確認したが、全例、純度の高いDNAを抽出することができ、PCRも行うことができた。小さな病変では、十分量抽出できないことを懸念したが、2x2mmの皮膚病 変でも、切片3枚から十分量DNAを抽出することができた。
現在、サンプルを収集中である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

サンプル収集に時間がかかっている

Strategy for Future Research Activity

腫瘍のBRAF V600E定性を行い、LCHでも、血漿BRAF V600E解析が、信頼できるかどうかを検討する。

Causes of Carryover

検体の収集が遅れたため、サンプル解析が遅延した。cell-free DNA抽出用の試薬として、KAPA SYBR® FAST Master Mix (2X) ROX Low、Nucleo Spin Plasma XS(50)、BRAF V600E用の試薬として、BRAF Mutation Detection Kit (32preps)、Entrogen社　BRAF-RT-50　BRAF　V600E 　Mutation　Analysis　Kit for Real 、MicroAmp® Fast Optical 96-Well Reaction Plate、Optical Adhesive Covers  Part No.4360954 Applied Biosystems、QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)　Cat.no.  56404を購入する計画である。