2017 Fiscal Year Research-status Report
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16K19842
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
市橋 成夫 奈良県立医科大学, 医学部, 学内講師 (60597102)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | PAD / Endovascular treatment / SFA / Endothelial layer |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はステント内腔側表面が内皮細胞層に完全に被覆された金属ステント バイオステントの開発を行ってきた。本研究ではステントとして薬剤溶出ステント (drug eluting stent: DES)を使用した。DESではステント表面からの溶出薬剤により、平滑筋細胞増殖、内膜過形成が抑制され、良好な成績が示されているが、ステント内面の内皮化をも妨げ、ステント留置後晩期の血栓形成が問題とされている。予めステント内部を内皮化することで、内膜過形成や血栓形成を抑制することが目的である。ヒトの臍帯から臍静脈と動脈を分離し、臍静脈から内皮細胞を分離培養した。内皮細胞の増殖を待って、DESのカバー作成を行った。DESはZilver PTX 6mm径を2cm長に切断したものを用いた。DESをシリコンチューブの中に挿入し、ステント内部には金属棒を挿入、シリコンチューブと金属棒の間隙にフィブリンゲルを注入する。15分後にフィブリンが重合されたのを確認した後に金属棒を除去し、フィブリンで作成されたカバー付きDESの内部に内皮細胞を注入し、二日間static conditionにて内皮細胞のフィブリン膜への生着と増殖を促した。二日間の条件付けと、フィブリン膜厚みを500μmに最適化することで、フィブリン膜へconfluentな内皮細胞層の確立に成功した。HUVECsでの内皮層の確立を受けて、ビーグル犬への動物実験に移行した。ビーグル犬の内皮細胞の分離は、大腿静脈を露出、切開して行った。大腿静脈は径2－3mmと細径であり、切離した4-5cmの切片はさらに収縮して2cmほどに短縮化したため、その後の分離培養に難渋した。数は少ないながらも採取できた内皮細胞を培養し、DES内面にconfluentな内皮細胞層を達成できた。現在ステントのカテーテル内への収納を繰り返し施行し、内皮層へのダメージ軽減のための最適化を模索している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ビーグル犬の静脈が予想以上に短径で、さらに採取後に短縮したために、細胞分離の操作に難渋し、熟練を要した。また採取できた細胞数も少なく、細胞培養にも時間を要した。DES内面に内皮層を確立した後、ビーグル犬への留置に際して、内皮層へのダメージを避けるためにカテーテルを用いたステントデリバリーは避け、頸静脈を外科的に露出し、ステントを直接留置することを試みたが、ステント径の方が静脈径より大きく、縫合閉鎖ができなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
内皮化されたDESのカテーテル内への収納、経カテーテル的ステント留置法を確立する。ビーグル犬への留置実験を複数回繰り返し、DESと内皮化DESにおける、開存率の差異、内膜過形成や血栓形成について評価を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
大学内他診療科からビーグル犬の無償譲渡があった。ビーグル犬からの静脈採取、細胞分離、培養に難渋し、内皮化ステント作成に遅延が生じた。
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Research Products
(1 results)
