Transcriptional regulation of the fibrillar collagen genes, type XI and XXVII collagens, expressed in chondrocytes

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K20064
• Research Institution: Oita University
• Principal Investigator: 樋田 真理子 大分大学, 医学部, 客員研究員 (10737224)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: コラーゲン / 転写 / 軟骨

Outline of Annual Research Achievements

１)XXVII型コラーゲン遺伝子の選択的プロモーターの基本転写調節機構を調べる。XXVII型コラーゲン遺伝子は、軟骨組織に発現している事は分かっているが、その発現調節機構についての情報は全くない。申請者は、この遺伝子の基本転写調節機構の解析を進めたところ、２つの転写産物が存在し、その発現が異なっている（軟骨・皮膚）事を見出した。一方、この遺伝子の選択的プロモーターのメカニズムおよび関与する転写因子については全くわかっていない。そこで、１：基本プロモーター領域をルシフェラーゼアッセイにより決定し、２：関与する転写因子をゲルシフトアッセイ、特異抗体を用いたChipアッセイ等で同定する。
２）発見したXIおよびXXVII型コラーゲン遺伝子に存在する軟骨特異的エンハンサー領域を導入したトランスジェニックマウスを作製し、個体レベルでの発現パターンを解析する。２つの軟骨特異的シスエレメントの個体レベルでの活性を検討するために、１：エンハンサー領域を含んだコンストラクトDNAを構築後、作製したコンストラクトDNAを、マイクロインジェクション（または、CRISPR-Cas9システム）により受精卵に導入してトランスジェニックマウスを作製する。２：トランスジェニックマウスは、胎生13.5～16.5日で取り出し、Xgal染色後（又はGFP）にホールマウントまたは切片を作製し、エンハンサー活性の発現パターンを解析すると共に、免疫染色により関与する因子の生体内での作用機序を明らかにする。