Pathological analysis of immortalized endometriotic cells by introducing sex hormone receptor genes

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K20180
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 保野 由紀子 金沢大学, 医学系, 協力研究員 (80565416)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 子宮内膜症 / 不死化細胞 / 性ステロイドホルモン

Outline of Annual Research Achievements

不死化子宮内膜間質細胞株の樹立、不死化細胞への各種性ステロイドホルモン受容体の遺伝子導入、遺伝子導入上皮およ び間質細胞に対する性ステロイドホルモン作用の解析と発現変化する遺伝子群のスクリーニングを行なうことを計画した。 文書により同意を得た患者の手術検体から得た卵巣チョコレート嚢胞壁から間質細胞を分離し、レンチウイルスベクターシステムにて CDK4/TERTまたは、TERTのみを遺伝子導入して安定的に継代可能な不死化細胞株を樹立した。上皮細胞マーカーとしてサイトケラチン を、間質細胞マーカーとしてCD10をRT-PCRおよび免疫細胞染色にて確認したところ、どちらの不死化細胞株も間質由来であることを確 認した。RT-PCRおよびWestern blotによ る性ステロイドホルモンの受容体の解析ではEstrogen receptor (ER)α、Progesterone receptor (PR)B陽性であったが、PRAの発現は認められなかった。この細胞株に プロゲスチン製剤であるMPAを投与し、細胞増殖を確認したところ、内膜症組織に特有の有為な細胞増殖抑制効果を確認した。 以上より、子宮内膜症病巣由来の不死化子宮内膜間質細胞株を樹立し、以前より作成している不死化上皮細胞とともに子宮内膜症の病 態を解明する培養実験系を確立した。 また、不死化上皮細胞にERα、PRA、PRB、不死化間質細胞にERαが導入できた。不死化上皮細胞にPRA、PRBを導入しMPAによる細胞増殖能を確認したところ、MPA2nMでは、PRAの遺伝子導入した細胞株のみに有意な細胞増殖抑制効果を確認し、子宮内膜症由来の不死化細胞株は、プロゲスチンによる増殖抑制メカニズムが正常子宮内膜上皮細胞と違う可能性が示唆された。