後発白内障におけるプロテオグリカン・デコリンの関係と機能解析

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K20336
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 柴田 伸亮 (稲垣伸亮) 金沢医科大学, 医学部, 助教 (30440514)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 眼生化学・分子生物

Outline of Annual Research Achievements

動物実験の遅れを考慮し、動物実験と並行し平成30年度の計画である白内障術後の後嚢混濁(PCO)で上昇するTGFβによるデコリン(DCN)発現の変化や、DCN添加によるTGFβに誘導される遺伝子群の抑制効果や細胞増殖能の解析を平成29年度に施行した。TGFβ2とFGF2添加によるLECでのDCN発現変化と、DCNが細胞増殖に与える影響について解析した結果、培養ヒト水晶体上皮細胞(HLEC)、マウスLEC (MLEC)ともに、FGF2添加により濃度依存的にDCN mRNA発現の増加を認めた。また、HLECへの、DCN添加によりLEC生細胞の増殖能の亢進や減少は認めないことが分かった。
DCN機能解析にはDCN遺伝子改変マウス作成が必須であるが、他のDCN-siRNAによる、ノックアウト（KO）実験より、DCN-KOによりEMTは影響を受けないとの結果が得られた。よって、DCN-KOではなく、DCNトランスジェニックマウス作成を開始した。DCN遺伝子改変マウスの有用性を検討するため、マウスを用いたPCOモデルを作成し、ラットと同様なDCN発現変化がみられるかを解析した結果、マウスPCOモデルでも術直後と比較してDCN発現は上昇しており、今後のPCO発症機構の解明にDCN遺伝子改変マウスは有用と推測された。現在、水晶体特異的にDCNを発現させるクリスタリンPax6プロモーターにDCNをつなげた発現ベクターを作成し、F0マウス作成に成功した。次年度に、マウスを繁殖しF1no機能解析を行う。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画の順番の前後はあるが、最終計画どおりに実験が進行しているため。

Strategy for Future Research Activity

DCNトランスジェニックマウス水晶体の表現型の解析およびマウスPCOモデルを作成する。PCOモデルにおいてDCN過剰発現によるPCO抑制効果を組織切片で解析する。

Causes of Carryover

最終年度に実験を増やしため、必要な試薬の購入費に使用する。