2016 Fiscal Year Research-status Report
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16K20351
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Research Institution | Chiba University |
Principal Investigator |
山路 佳久 千葉大学, 医学部附属病院, 医員 (80400951)
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Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | 大網 / リンパ浮腫 / 腹部リンパ浮腫モデル / 乳斑 / リンパシステム可視化モデル |
Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は細切大網乳斑注入移植によるリンパ管ネットワークの回復とその機序を明らかにし、リンパ浮腫治療に最適化された大網乳斑移植法を確立することである。 そのためにまず我々は人間の新鮮解剖体を用いて実体顕微鏡と組織標本作製による大網の観察を行った。胃大網動静脈沿いのリンパ管、リンパ節の検索、また末梢部での検索を行った。結果は、胃大網動静脈沿いには多数のリンパ管を認め、リンパ管移植としての機能を十分に持つ可能性が考えられた。また大網の大きさには個人差が大きいこと、リンパ管は豊富に認められるが、乳斑の同定、生理学的機能については生体でないと困難であることがわかった。下肢と大網のリンパ管の違いを検索中である。 次に生体での大網の観察と機能評価を目的に、マウスでのモデルを作成した。まず、大網の移植においては下肢よりも腹部のほうが解剖学的に近いため、大網移植がリンパ浮腫にどのように働くかを見る上で腹部リンパ浮腫モデルのマウスの方が下肢リンパ浮腫モデルより重要と考え、腹部リンパ浮腫モデルマウスの作成の確立を行った。そして、まず血流を保ったまま有茎大網移植を行い観察を行うのであるが、生理機能の評価には再度開腹をせずに体表からの経時的観察が重要である。そのため、体表からリンパシステムの観察と定量評価が可能になるリンパシステム可視化モデルマウスをさらに開発した。これにより、種々の移植による効果が経時的に、また定量として評価が行えるようになる。実際にリンパ節移植と大網移植を行い、リンパ管の増生を体表より確認し得た。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
大網の機能についての研究としては順調に進んでいる。しかし、当初予定していた動物モデルからさらに適した動物モデルに変更し、作成を行ったため、予定と多少変更を生じている。
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Strategy for Future Research Activity |
今回作成したマウスモデルを用いて、健常状態とリンパ浮腫部移植状態、リンパ浮腫に大網移植、リンパ浮腫にリンパ節移植、リンパ浮腫に大網乳斑分割移植の群に分けて、それぞれリンパ管生成に関わるサイトカイン(CXCL13, 19, CCL21, RANKL, IL-7)、接着因子(VCAM-1, ICAM-1),増殖因子VEGF-C,核内転写因子Prox-1, 核内受容体COUP-TFII等について遺伝子発現解析を行う。また、移植組織を回収し、HE 染色、alpha-SMA染色, Podoplanin染色、LYVE-1染色、D2-40染色で評価する。表面抗原FACS解析により免疫機能評価を行う。周囲組織細胞のPROX1・Flt4・CD31発現定量をin situ hybridization法も用いて解析する。リンパ管機能評価をBODIPY FL C16蛍光法、Evans blue dye法、indocyanine green近赤外線法で行う。また、IVISを用いた蛍光法により、種々の移植によるリンパ浮腫の改善効果を経時的観察し、また定量評価を行う。 さらに、乳斑とリンパ節のリンパ管再生に関わる遺伝子のエピジェネティック修飾解析リンパ管形成関連遺伝子のDNAプロモーター領域のCpGislandメチル化率解析を行い、細胞が潜在的に保持する内在的性質の違いを明らかにする。 乳斑の組織親和性解析を行う。具体的には(1)組織を構成する代表的な線維であるタイプI, IIIコラーゲンおよびその他のファイバー、フィラメントに対する乳斑の接着性をcell adhesion assayで測定する。(2)乳斑のコラーゲン分解能を総MMP活性測定、 各MMP分泌能をELISAで測定する。
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Causes of Carryover |
物品費、旅費、人件費を予想より安く抑えることが出来、次年度の研究に使うこととした。
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Expenditure Plan for Carryover Budget |
マウスの購入、各種基剤、測定器の購入に使用する。
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Research Products
(1 results)