口腔癌リンパ節転移における骨髄細胞の役割

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K20599
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 杉浦 圭 横浜市立大学, 医学研究科, 共同研究員 (50771086)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 口腔癌 / リンパ節転移 / 転移前ニッチ

Outline of Annual Research Achievements

昨年度に引き続き、ヒト舌癌細胞株OSC-19-Luc同所移植ヌードマウスモデルを用いて、マウス舌にヒト由来の舌癌細胞株を移植し、舌部分切除後に誘導されるCD11b+細胞の役割に関して実験を施行した。移植したマウスはIVIS systemによるライブイメージングシステムにより、舌の腫瘍の増殖及び頸部リンパ節転移の有無をマウスを生かしたまま経時的に評価し、そして経時的に舌及び頸部リンパ節組織を採取している。その後検体をスライスし、抗原タンパクCD11bやLYVE-1(リンパ管内皮細胞のマーカー)でそれぞれ経時的採取した検体を薄切・染色することにより、外科的介入後のどのタイミングでCD11b+細胞の流入があるか、リンパ管内皮細胞のチューブォーメンションがなされるかといった内容を解析中である。染色条件の検討や限られた検体数の中での実験であり、染色工程においてやや実験進行は遅延している。現在判明していることは、BALB/c nu/nuマウスの舌へのヒト由来舌癌細胞株の移植後頸部リンパ節への転移を認めていない時点ですでにマウス頸部リンパ節に腫大を認め、また全身における他部位のリンパ節腫大は認めないことから、腫瘍からのサイトカインが局所リンパ節へ流入することにより起きている可能性が示唆される。現在、一部抗体の染色条件の検討、染色を行った細胞種やチューブ構造などのカウント方法や解析方法の検討及び、他のマーカーの追加も検討している。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

動物実験計画は期間が必要であり時間が掛かる部分であるが、当初の実験計画で予定していた動物実験を施行できている。OSC-19-Lucヒト由来舌癌細胞をマウスの舌に同所移植し、マウスを生きたままIVIS systemによるライブイメージングシステムで原発腫瘍の増殖や大きさ、リンパ節転移の有無を観察しながら、経時的にマウスの舌及び頸部リンパ節の検体の採取を行えており、薄切しスライドを作成して逐次染色していく。傾向を把握の後、次の実験へシフトし仮説に対する裏付けをできるよう施行していく。

Strategy for Future Research Activity

OSC-19-Lucヒト由来舌癌細胞をマウスの舌に同所移植してライブイメージングシステムで原発腫瘍の増殖や大きさ、リンパ節転移の有無を観察しながら、経時的にマウスの舌及び頸部リンパ節の検体の採取を行った。得られた多くの検体は一部スライス・スライド作成しされている。LYVE-1やD2-40による染色でリンパ管の状態・増殖や、CD11bやCD206などのマーカーによる染色によって骨髄細胞がどのようにかかわっているかを時系列でカウントし、解析していく。

Causes of Carryover

ヌードマウスといった高額動物使用実験における進行が良好に行われ、実験試行回数が当初の予定より少ない回数で検体の採取を行えたことに加え、追加染色における抗体や薬品の購入を今後行い費用をそちらに充てる予定。