Mechanism of hypothalamic Corticotropin Releasing factor regulation by Leptin

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K20891
• Research Institution: Hirosaki University
• Principal Investigator: 山形 聡 弘前大学, 医学部附属病院, 助教 (50769940)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: Leptin / CRF

Outline of Annual Research Achievements

CRFニューロン蛍光可視化マウス（CRF-Venusマウス）におけるVenus陽性ニューロンの性格づけを行うため，急性脳スライスを用い以下の電気生理学的検討を行った．視床下部室傍核におけるVenusニューロンを-60mVに電位固定し興奮性シナプス後電流（EPSC）を観察した．EPSCがnon-NMDA拮抗薬 CNQX（20μM）およびNMDA拮抗薬AP5（100μM）で遮断されることを確認した．よってVenus陽性ニューロンにグルタミン酸作動性入力が存在することが証明された．次にgramicidin添加により細胞内Clイオンがピペット内液に置き換わるのを抑えた条件で，CNQX，AP5存在下で抑制性後シナプス電流（IPSC）を観察した．IPSCはGABA受容体アンタゴニストであるgabazine（20μM）で完全に消失した．よってVenus陽性ニューロンにGABA作動性入力が存在することが証明された．また，CRFニューロン選択的ChR2発現マウス（ChR2-mCherry/CRF-iCreΔNeo)を用いた検討では，ほぼ全てのCRFニューロンにChR2が発現した．CRFニューロンは青色光により脱分極・発火した．TTXは青色光によるCRFニューロンの発火を阻害した．Cdは青色光によるCRFニューロンの発火を抑制しなかった．CRFニューロンへの青色光照射によりPVHや他の脳領域においてc-Fos発現が増加した．