2018 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of molecular pathogenesis of AFib amyloidosis and therapeutic development
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16K21066
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
吉長 恒明 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 助教 (30770226)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | フィブリノーゲン型アミロイドーシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
FibrinogenAα鎖遺伝子の4899_4902delAGTG変異が挿入されたヒト型fibrionogenを産生するChinese Hamster Ovary(CHO)細胞の検体を用いて解析を行った。細胞培養の途中で採取される培養上清(細胞外成分)とCHO細胞自体を破壊して採取される細胞破砕液（細胞内成分）を用いて比較検討の方法をとった。これらの溶液内の異常Aα部位の検出を最優先とし、まず細胞破砕液においてSDS-PAGEをし、通常のCBB染色と免疫沈降法（抗フィブリノーゲン抗体）を用いて実験を施行したが、数か所の陽性バンド部位からゲルを切りとり、質量分析計にかけたがAα鎖自体が検出されなかった。次に抗Fibrinogen抗体と抗Aα鎖抗体を用いて上清と細胞破砕液を用い、プロテインAセファロースを用いたところ、同じく検出できなかった。次に以前施行されたWestern blotの陽性部位と照らし合わせ（陽性バンドと異なる分子量の位置）、陽性バンド以外を狙ってAα検出部位をバンド上で同定することができた。質量分析の結果得られたペプチドは正常Aα鎖で600の末端近くまで検出されるが、異常Aα鎖では475近傍までのみであり、その後は検出されなかった。生成された蛋白は正常型に比べ、より不安定で分解しやすいことが質量分析結果からも推測された。この変異Aα鎖の断端がゲルのより分子量の小さいところに流れていないかde novoシークエンス（ペプチドの一部のみでも推測する方法）を用いておこなったが、変異ペプチドの断端は得られなかった。MALDI-TOFでの解析は免疫沈降法の後、検出する予定だが、目標分子量の設定がうまくいかず、まだ実験結果が得られなかった。
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[Journal Article] Monitoring treatment response to tafamidis by serialnative T1 and extracellular volume in transthyretinamyloid cardiomyopathy2019
Author(s)
Shintani Y, Okada A, Morita Y, Hamatani Y, Amano M, Takahama H, Amaki M, Hasegawa T, Ohta-Ogo K, Kanzaki H, Ishibashi-Ueda H, Yasuda S Shimazaki C, Yoshinaga T, Yazaki M, Sekijima Y, Izumi C
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Journal Title
ESC Heart Failure
Volume: 6
Pages: 232-236
DOI
Peer Reviewed
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