TRU型肺腺癌の起源細胞候補であるTTF-1/p63共陽性細胞の性質の解明

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K21648
• Research Institution: National Cancer Center Japan
• Principal Investigator: 山田 健二 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 外来研究員 (70645069)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 肺癌 / TRU / TTF-1 / p63 / 組織幹細胞 / 初代培養 / 培養法 / 発がんモデル

Outline of Annual Research Achievements

目的①TTF-1/p63共陽性細胞を適切に分化させる三次元培養法の開発
実施事項:実験計画:TTF-1/p63共陽性細胞がClub細胞あるいはII型肺胞上皮細胞へ分化するかどうかを明らかにするための三次元培 養法について、様々な上皮細胞の三次元培養の論文などをあたり、実験計画を策定した。
目的②TTF-1/p63共陽性細胞の幹細胞性の解析
実施事項:実験計画:TTF-1/p63共陽性細胞からTTF-1とp63のreporter cell lineを作製するために、CRISPR/Cas9システムを用いたゲ ノム編集によりTTF-1、p63と蛍光蛋白の融合遺伝子を発現するisogenic cell lineの作製を試みる。その際に本来のTTF-1/p63の機能 を失わないようにするためのゲノム編集部位の決定や、ゲノム編集に使用するCRISPR/Cas9の設計、ターゲティングベクターの設計、TTF-1/p63共陽性細胞への導入法について実験計画を策定した。
目的③TTF-1/p63共陽性細胞を用いたTRU-type肺腺癌モデルの作製 実施事項:EML4-ALKを単独でtet-OFFシステムで発現させるためのレンチウイルスベクターを構築し、TTF-1/p63共陽性細胞への遺伝子導入とDOXによる発現誘導の確認を行った。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

申請者のその他の業務の多忙のため。

Strategy for Future Research Activity

科研費交付申請書に記載した研究実施計画は遅れを見込んで4年間で完結できるようにある程度余裕をもって計画したが、進捗の遅れが大きいため、CRISPR/Cas9システムを用いたゲ ノム編集によりTTF-1、p63と蛍光蛋白の融合遺伝子を発現するisogenic cell lineの作製については優先度を下げ、平成29年度に作成したEML4-ALKを誘導性に発現するTTF-1/p63共陽性細胞のマウスへの移植実験を優先して取り組む。

Causes of Carryover

平成28年度の繰り越し金が多かったこと、および平成29年度の実験の進捗が遅れていることにより次年度の繰り越しが生じた。平成30年度は、遅れている実験(主としてマウスを用いた移植実験)を行うために繰り越した助成金と本年度請求助成金を用いる予定である。