| Research Abstract |
1.現在p53の癌特異的なアポトーシス誘導活性を利用した遺伝子治療の臨床研究が行われているが,p53遺伝子治療に抵抗性の腫瘍が存在することが知られている.p53ファミリーに属するp63およびp73は,p53と構造的・機能的類似性が高く,強力なアポトーシス誘導活性を有する.本研究では,p53ファミリー遺伝子を発現する組換えアデノウイルスベクターを用いて,11種類のヒト骨肉腫細胞に対する抗腫瘍活性をin vitroおよびin vivoの系で比較解析し,癌治療への応用の可能性を検討した.
(1)5株ではAd-p53導入によりアポトーシスが誘導されたが,残りの6株ではp53によるアポトーシスに抵抗性であった.Ad-p63γ導入では,p53抵抗性の3株を含む8株でアポトーシスが誘導された.
(2)遺伝子増幅によりMDM2タンパクの発現上昇を認めた2株では,p53に比較してp73βおよびp63γ導入でより強いアポトーシスが誘導された.
(3)p73β,p63γはp53と同様に,遺伝子導入単独ではアポトーシスに抵抗性の腫瘍細胞における抗癌剤に対する感受性を促進した.さらに,ヌードマウス皮下移植モデルにおいても,p63γはp53と同様に抗腫瘍活性を示した.
2.我々は,これまでp53ファミリーの機能を媒介し直接実行する標的分子の同定を行ってきた.本研究では,p63およびp73の直接の標的分子として脂質ラフト構成タンパクであるFLOT2(flotillin-2)を新たに同定した.
(1)マウス・ヒト細胞でp73あるいはp63の強制発現により内在性FLOT2遺伝子およびタンパク発現が上昇した.また,CDDP処理後のFLOT2の発現誘導は内在性p73発現に依存していた.
(2)FLOT2遺伝子の上流にはp73,p63に特異的な応答性配列が認められ,種を越えて保存されていた.
(3)p63を強制発現させた細胞ではIL-6シグナル伝達経路が活性化されており,その効果は内在性FLOT2発現に依存することをFLOT2に対するsiRNAで検証した.
(4)以上の結果より,p73,p63はFLOT2の発現誘導を介して,細胞分化,炎症反応に関わっている可能性が示唆された.
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