2005 Fiscal Year Annual Research Report
タンパク質タグの付加による細胞内タンパク質の局在・機能変換の構造学的研究
Project/Area Number |
17028046
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Research Institution | Yokohama City University |
Principal Investigator |
杤尾 豪人 横浜市立大学, 大学院国際総合科学研究科, 助手 (70336593)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白川 昌宏 京都大学, 工学研究科, 教授 (00202119)
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Keywords | ユビキチン / SUMO / タンパク質タグ / NMR / 構造生物学 |
Research Abstract |
1)ユビキチン-UBA相互作用様式の解析 ユビキチン結合モチーフの一つであるUBA(ubiquitin associated)ドメインとユビキチンの複合体の溶液中での構造をNMR法によって決定した。これにより、ユビキチン-UBA間の相互作用様式を原子分解能で解明した。これらの成果を論文発表した(Structure,2005)。 2)ユビキチン-VHSドメイン相互作用様式の解析 STAM2のVHSドメインは、近年、ユビキチンに結合することが示された。ユビキチンのNMRシグナルを観測しつつ溶液NMRを用いた滴定実験を行ない、ユビキチンのVHSとの相互作用表面がUIMとの相互作用面とほぼ共通であることを明らかにした。また、^<13>C,^<15>N二重標識したVHSドメインを調製し、三重共鳴NMRを測定し、主鎖原子核(アミド^1H,アミド^<15>N,^<13>Cα,^<13>Cβ)の化学シフト帰属を行なった。次に、VHSのNMRシグナルを見ながら、上記と同様のNMR滴定実験を行ない、主鎖帰属を基に、VHS側のユビキチンとの相互作用残基も同定した。 3)SUMOによるSUMO化タンパク質の機能・構造変換 SUMO-1化されたTDG(Thymine DNA glycosylase)の結晶構造を決定し、論文発表した(Nature,2005)。この構造により、SUMO-1化されたTDGがDNA結合活性を失う分子機構を説明できた。また、SUMO-3化されたTDGの結晶構造も決定し、論文化した(J.Mol.Biol., accepted)。
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[Journal Article] Structural characterization of the MIT domain from human Vps4b.2005
Author(s)
Takasu, H., Jee, J.G., Ohno, A., Goda, N., Fujiwara, K., Tochio, H., Shirakawa, M., Hiroaki, H.
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Journal Title
Blochem Biophys Res Commun 334
Pages: 460-465
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[Journal Article] Structure of the UBA domain of Dsk2p in complex with ubiquitin molecular determinants for ubiquitin recognition.2005
Author(s)
Ohno, A., Jee, J., Fujiwara, K., Tenno, T., Goda, N., Tochio, H., Kobayashi, H., Hiroaki, H., Shirakawa, M.
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Journal Title
Structure 13
Pages: 521-532
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[Journal Article] Molecular mechanism of a temperature-sensitive phenotype in peroxisomal biogenesis disorder.2005
Author(s)
Hashimoto, K., Kato, Z., Nagase, T., Shimozawa, N., Kuwata, K., Omoya, K., Li, A., Matsukuma, E., Yamamoto, Y., Ohnishi, H., Tochio, H., Shirakawa, M., Suzuki, Y., Wanders, R.J., Kondo, N.
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Journal Title
Pediatr Res 58
Pages: 263-269
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[Journal Article] Crystal structure of thymine DNA glycosylase conjugated to SUMO-1.2005
Author(s)
Baba, D., Maita, N., Jee, J.G., Uchimura, Y., Saitoh, H., Sugasawa, K., Hanaoka, F., Tochio, H., Hiroaki, H., Shirakawa, M.
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Journal Title
Nature 435
Pages: 979-982
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[Journal Article] Plc1p, Arg82p, and Kcs1p, enzymes involved in inositol pyrophosphate synthesis, are essential for phosphate regulation and polyphosphate accumulation in Saccharomyces cerevisiae.2005
Author(s)
Auesukaree, C., Tochio, H., Shirakawa, M., Kaneko, Y., Harashima, S.
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Journal Title
J Biol Chem 280
Pages: 25127-25133