2005 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子発現制御におけるDECODE複合体の分子作用機構の解析
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17054033
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
緒方 一博 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (90260330)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 光 横浜市立大学, 医学部, 助手 (90300962)
椎名 政昭 横浜市立大学, 医学部, 助手 (30347299)
浜田 恵輔 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00344052)
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| Keywords | 転写制御因子 / エンハンセオソーム / Runx1 / Ets1 / MeCP2 / ヒストンシャペロン / クロマチンリモデリング / 化学修飾 |
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| Research Abstract |
1.転写制御因子間の会合によるエンハンセオソーム形成とその制御機構の解析
Runx1-DNA複合体およびRunx1-CBFβ-DNA複合体におけるRunx1の揺らぎの制御の解析と生化学的機能解析を行い、CBFβによるアロステリックなRunx1のDNA結合活性制御機構がRunx1の揺らぎの安定化であることを明かにしつつある。
また、TCRαエンハンサー配列上で形成される,Runx1とEts1を含んだ高次複合体の結晶化条件の検討を行い、結晶化に成功した。
MeCP2による抑制系のリプレッソソームの形成機構の解明、およびポリヌクレオソームの構造変換の機構を解析するため、MeCP2の結合DNAであるメチル化CpG配列との複合体の結晶化条件の検討を行い、いくつかの条件で結晶を得た。
2.ヒストンシャペロン、クロマチンリモデリング因子およびピストン修飾酵素によるヌクレオソームの変換機構を解析
ヒストンシャペロンの一つであるNap-1とヒストンとの複合体、ATP依存性クロマチンリモデリング因子ACF(ISWI-Acf-1複合体)およびACF-ヒストン複合体、および転写のコアクチベータであるCBP/p300の構造解析を開始した。これらのさまざまな領域を含むタンパク質を調製し、結晶化条件の検討を行った。Nap-1とヒストン複合体については、一部の条件で微小結晶を得た。
3.転写制御因子の化学修飾による活性制御機構の解
Ets1のリン酸化を例として解析を進めた。Ets1のリン酸化方法とリン酸化タンパク質の精製法とともに、リン酸化状態を評価するための2次元電気泳動および質量分析計を用いた実験系を確立した。
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