2005 Fiscal Year Annual Research Report
染色体複製開始タンパク質の機能制御因子とその作動メカニズムの解明
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17080005
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
片山 勉 九州大学, 薬学研究院, 教授 (70264059)
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| Keywords | DNA複製 / 細胞周期 / ネットワーク / クランプ / フィードバック制御 / ATP / タンパク質高次複合体 / 試験管内再構成 |
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| Research Abstract |
本計画研究では、精製タンパク質によるミニ染色体複製再構成系などの高度解析基盤をもつ大腸菌を対象として、複製開始に関わる制御システムの分子機構とネットワークを明らかにする。5年計画の初年度となる本年度では研究計画に従って以下の実績の構築に至った。
1 複製開始制御に関わるDnaA, Hda,クランプ分子の機能構造解析
部位特異的変異導入法などを用いて、特にDnaAおよびHdaのヌクレオチド結合と構造変化に関わる部位を同定し、その機能を解析した。またクランプ-Hda複合体の動態解析を進めた。成果の一部を論文発表した(JBCおよびJSB)。Hdaと遺伝的相互作用を示す因子の同定と解析を行った(Mol.Microbiol.)
2 Hdaに結合するヌクレオチドの機能の解析
アデニンヌクレオチドとの結合が欠損するHda変異体の分離に成功し、複製開始制御における意義を確認した。
3 DnaA再活性化因子の探索
候補因子について、in vitroで機能構造解析、in vivoで複製開始への役割を解析した。
4 DnaA結合因子の探索と解析
プロテオミクス手法により多数の候補因子を同定した。一部についてはDnaAとの相互作用に必要な機能構造を同定した。
5 クランプ結合因子の探索と解析
プロテオミクス手法により多数の候補因子を同定した。一部についてはクランプとの結合を再確認し、変異体を解析した。
6 過剰複製に対応する細胞応答システムの解析
当該応答システムに直接関わる可能性のある新たな候補因子を2種同定した。これらの遺伝子、およびこれまでに分離同定していた遺伝子から応答システムのメカニズムを推定した。
7 複製制御因子の細胞内局在性の解析
仁木班に提供するGFP融合遺伝子を作成した。
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Research Products
(5 results)
