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2005 Fiscal Year Annual Research Report

複製フォーク複合体の構築、維持、変換の研究

Research Project

Project/Area Number 17080006
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

釣本 敏樹  九州大学, 理学研究院, 教授 (30163885)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 石野 良純  九州大学, 農学研究院, 教授 (30346837)
Keywords複製フォーク / 複製装置 / DNA損傷 / 染色体 / クランプ / ATPase
Research Abstract

複製フォーク複合体を染色体サイクルでの複製と染色体恒常性維持との共役点としてとらえ、ヒトおよび古細菌の複製因子PCNAを中心とする機能的複製フォーク複合体の構築原理の解明を進め、次の研究成果を得た。
1.染色体接着に関与するヒトPCNAの新規ローダー、Ctf18-RFCの標的因子検索を目的として、Ctf18-RFCとPCNAによって特異的に活性促進を受けるDNAポリメラーゼの精製を行った。その結果、DNA損傷乗り越え合成を行うpolηを同定した。さらに、polηがCtf18-RFCと相互作用することを明かにした(釣本)。
2.PCNAユビキチン化による複製と修復の機能連係の解析のため、in vitroのPCNAユビキチン化反応系を構築し、PCNAローディング反応をユビキチン化反応と連動させることで、高効率のPCNAユビキチン化が起きることを明かにした。さらにユビキチン化PCNAによりDNA損傷乗り越え合成酵素polηの活性を促進することを明かにした(釣本)。
3.染色体安定性維持に関わる新規PCNAローダー、ヒトElg1複合体の昆虫細胞を用いた発現系を作成し、RFC小サブユニットと共発現することでローダー型複合体が再構築できることを明かにした(釣本)。
4.超好熱古細菌Pyrococcus furiosus由来の蛋白質因子を用いて、クランプローディング、ラギング鎖プロセシング、組換え修復過程に相当するPCNA-RFC複合体,DNALIgase-PCNA-DNA複合体、Hjm-PCNA複合体を再構築し、その構造と機能についての解析を行った(石野)。
5.ファンコニ貧血症の原因遺伝子のホモログで、石野が古細菌から発見した組換え修復関連タンパク質Hefの複製フォーク停止修復過程における働きの解明を進めた。さらに釣本と協力してヒト細胞におけるFLAG-Hef発現細胞を構築した(石野)。

  • Research Products

    (8 results)

All 2006 2005

All Journal Article (7 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] The archaeal Hjm helicase has recQ-like functions, and may be involved in repair of stalled replication fork.2006

    • Author(s)
      Fujikane, R.
    • Journal Title

      Genes Cells 11

      Pages: 99-110

  • [Journal Article] Stoichiometric complex formation by proliefrating cell nuclear antigen (PCNA) and its interacting protein : purification and crystallization of the DNA polymerase and PCNA monomer mutant complex from Pyrococcus furiosus.2006

    • Author(s)
      Nishida, H.
    • Journal Title

      Acta Cryst. F62

      Pages: 253-256

  • [Journal Article] Mechanisms of Maintaining Genetic Stability by Homologues Recombination.2006

    • Author(s)
      Ishino, Y.
    • Journal Title

      Chem Rev. 106

      Pages: 324-339

  • [Journal Article] Structure-specific DNA nucleases : structural basis for 3D-scissors.2006

    • Author(s)
      Nishino, T.
    • Journal Title

      Curr.Opin.Struct.Biol. 16

      Pages: 1-8

  • [Journal Article] Human Werner helicase interacting protein 1 (WRNIP1) functions as a novel modulator for DNA polymerase δ.2005

    • Author(s)
      Tsurimoto, T.
    • Journal Title

      Genes Cells 10

      Pages: 13-22

  • [Journal Article] Identification of the critical region in Replication factor C from Pyrococcus furiosus for the stable complex formation with proliferating cell nuclear antigen and DNA.2005

    • Author(s)
      Nishida, H.
    • Journal Title

      Genes Genet.Syst. 80

      Pages: 83-93

  • [Journal Article] Open clamp structure in the clamp-loading complex visualized by electron microscopic image analysis.2005

    • Author(s)
      Miyata, T.
    • Journal Title

      Proc Natl Acad USA. 102

      Pages: 13795-13800

  • [Book] PCNA and RFC proteins in Genomic Stability. (in DNA Replication in Eukaryotic Cells (2^<nd> Edition) ed. DePamphilis, M.L.)2006

    • Author(s)
      Tsurimoto, T.
    • Publisher
      Cold Spring Harobor Press (New York)(In press)

URL: 

Published: 2007-04-02   Modified: 2016-04-21  

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