2006 Fiscal Year Annual Research Report
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17080006
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
釣本 敏樹 九州大学, 理学研究院, 教授 (30163885)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石野 良純 九州大学, 農学研究院, 教授 (30346837)
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| Keywords | 複製フォーク / 複製装置 / DNA損傷 / 染色体 / クランプ / ATPase |
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| Research Abstract |
複製フォーク複合体を染色体サイクルでの複製と染色体恒常性維持との共役点としてとらえ、ヒトおよび古細菌の複製因子PCNAを中心とする機能的複製フォーク複合体の構築原理の解明を進め、次の研究成果を得た。
1.染色体接着に関与するヒトPCNAの第2のローダー複合体Ctf18-RFCおよびPCNAによって特異的に活性促進を受けるDNAポリメラーゼとしてpolηを同定した。さらに、polηがCtf18-RFCと直接相互作用し、活性促進を受けることを明かにした(釣本)。
2.polηとCtf18-RFCの関係に引き続き、他のDNAポリメラーゼとローダーの相互作用を解析したところ、RFCやDNAポリメラーゼεにも特異的相互作用があり、DNAポリメラーゼーローダー間の相互作用が多岐にわたり存在し、複製フォークでの機能制御に重要な役割を果たしていることを示した(釣本)。
3.チェックポイント応答系のクランプRad9-Hus1-Rad1複合体のRad9タンパク質がCKIIキナーゼと相互作用し、そのC末端の標的部位が特異的にリン酸化されることを明かにした(釣本)。
4.古細菌のDNA複製フォーク進行機構に関する研究で、ラギング合成時のDNAリガーゼによる連結反応について、成果が上がった。DNAリガーゼ全分子の結晶構造解析の結果、この酵素が基質を認識して結合する機構に対する理解が深まったのに加えて、PCNAがDNA鎖連結反応を促進すること、そして、リガーゼ-PCNAの相互作用について、新規の様式を発見した。さらに、DNAリガーゼ-PCNA-DNA、DNAポリメラーゼ-PCNA-DNAなどの三者複合体の構造解析を進めるための基礎実験を進めた。フォーク停止修復に関わるHef蛋白質については、ヒトホモログ(hHef)の遺伝子をクローニングし、発現系を構築して、蛋白質解析のための基盤を作った。(石野)。
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