2007 Fiscal Year Annual Research Report
水疱性類天疱瘡モデルマウス作成による病態メカニズムの解明と新規治療法の開発
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17209038
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
清水 宏 Hokkaido University, 大学院・医学研究科, 教授 (00146672)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
澤村 大輔 弘前大学, 医学部, 講師 (60196334)
清水 忠道 富山大学, 医学部, 教授 (70260396)
秋山 真志 北海道大学, 大学院・医学研究科, 准教授 (60222551)
芝木 晃彦 北海道大学, 大学病院, 講師 (40291231)
JAMES McMillan 北海道大学, 創成科学共同研究機構, 准教授 (30374721)
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| Keywords | 免疫学 / 動物 / 細胞・組織 / 内科 / 病理学 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は水疱性類天疱瘡(BP)モデルマウスを作成し,XVII型コラーゲン(COLXVII)に対する自己免疫性疾患の発症メカニズムを解明し、新規治療法を開発する事である。BPはCOLXVIIに対する自己抗体により全身に水疱を生じる、最も頻度の高い自己免疫性水疱症である。本研究ではCOLXVIIノックアウトマウス(KOマウス)を用いて疾患を忠実に反映するモデルマウスを作成し、解析を行った。
ヒトCOLXVII Tgマウスより採取した皮膚をC57BL/6マウスの背部に植皮し、血清中の抗ヒトCOLXVII抗体の産生を検討した。植皮による免疫の3週間後から蛍光抗体間接法で1280倍以上の高力価の抗ヒトVII型コラーゲン抗体の産生が確認された。リコンビナントCOLXVIIタンパクを用いたウェスタンブロット法では、180kDの分子量に一致した陽性所見が得られた。間接蛍光抗体法による抗体価の測定では、免疫8週後まで持続的に抗体価の上昇が認められた。免疫をしたC57BL/6マウスから、免疫3〜4週間後に脾細胞を調整し、放射線で前処置したCOLXVIIヒト化マウスの尾静脈から静注、移植した。移植後継時的に血中の抗体価測定したところ、移植後10日目より移植後4週まで高力価の抗ヒトCOLXVII抗体の産生が確認され、眼囲、口囲を主に紅斑、糜爛の形成が認められた。病変を病理組織学的に検討したところ、表皮下水疱の形成と、表皮-真皮境界部、真皮上層への炎症細胞浸潤がみられた。また、採取した皮膚組織を用いた直接蛍光抗体法では、表皮基底膜部にIgGとC3の沈着が確認された。以上の結果より、本研究にて作成されたマウスが、臨床的、病理組織学的にBPの病態を反映したモデルであると考えられた。
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