2007 Fiscal Year Annual Research Report
分子進化ファージライブラリー法を用いた感染阻害剤の開発
| Project/Area Number |
17300159
|
|---|
| Research Institution | Keio University |
|---|
Principal Investigator |
佐藤 智典 Keio University, 理工学部, 教授 (00162454)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松原 輝彦 慶應義塾大学, 理工学部, 助教 (10325251)
|
|---|
| Keywords | インフルエンザウイルス / ヘマグルチニン / 糖脂質 / ファージライブラリー / ペプチド / 感染阻害 / バイオパニング / 進化分子工学 |
|---|
| Research Abstract |
GM3結合性ペプチドのファージライブラリーによるスクリーニングを行った。すでに見出されていたc01ペプチドを用いてアラニンスキャニングを行い、糖鎖の認識に必要なモチーフ部分を決定した。モチーフ部分とそれ以外の部分に勾配をつけた変異を導入して分子進化ファージライブラリーを作製した。この変異ライブラリーを用いて、GM3単分子膜に対するアフィニティーセレクションを行い、得られたファージクローンのGM3結合活性をEL工SAにより評価した。c01と同等もしくはそれ以上の結合活性を有しており、さらにGM3への結合選択性が向上した配列が得られた。
また、インフルエンザウイルスヘマグルチニン(HA)に結合するペプチドをファージライブラリーよりセレクションを行った。昨年までとは異なったHAに結合する15アミノ酸残基の配列のHA認識に重要なアミノ酸(HA結合モチーフ)をアラニンスキャニングにより同定した。この結果を元にして、ランダム変異を導入した分子進化サブライブラリーを作製した。これらサブライブラリーを用いて再びH1型とH3型のHAに対して交互にバイオパニング操作を行った。セレクションにより得られた配列の結合活性をELISAによりHAとの結合活性の評価を行い、高い結合活性を有している1種類の配列を同定した。
|
