2005 Fiscal Year Annual Research Report
PCNAクランプによる複製と染色体接着の機能連係の研究
| Project/Area Number |
17370064
|
|---|
| Research Institution | Kyushu University |
|---|
Principal Investigator |
釣本 敏樹 九州大学, 理学研究院, 教授 (30163885)
|
|---|
| Keywords | 複製フォーク / 複製装置 / 染色体接着 / クランプ / クランプローダー / DNAポリメラーゼ |
|---|
| Research Abstract |
DNAスライディングクランプ、PCNAは、真核生物の様々なDNA代謝の中心的役割を果たす。PCNAは、本来、複製因子RFCによってDNAにロードされるが、染色体接着因子Ctf18を含む複合体もPCNAのローダーであることを見出した。そこでヒト細胞抽出液よりCtf18複合体がPCNAのローダーとして機能するための特異性決定因子、特異的標的DNAポリメラーゼの検索を行った。その結果、Ctf18複合体とPCNAによって特異的に活性促進を受けるDNAポリメラーゼを見出した。精製の進んだ標品を質量分析により解析したところ、DNA損傷乗り越え合成を行うpolηが同定された。組換えヒトpolηを使い、同様のアッセイを行ったところ、まったく同じ活性が得られ、polηはCtf18複合体とPCNAにより特異的に活性の促進を受けると結論付けた。さらに、polηとCtf18-RFCの相互作用を解析したところ、両者の物理的相互作用が明らかとなり、Ctf18複合体が直接polηの活性を制御していることが示された。このことは、polηが染色体接着過程で機能するか、Ctf18複合体がDNA損傷乗り越え合成反応に関与することを強く示唆している。また、別の解析で、複製型DNAポリメラーゼεと相互作用する因子の同定を行ったところ、Ctf18複合体が見出され、両者の間で安定な複合体形成が行われることが明かになった。したがって、Ctf18複合体は複数のDNAポリメラーゼと相互作用し、多面的に複製フォークと他の反応過程の連係役を果たしていると考えられる。
|
Research Products
(2 results)
