2005 Fiscal Year Annual Research Report
ブロモウイルスーシロイヌナズナ間における多層的な非宿主低抗性の分子機構の解明
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17380029
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
三瀬 和之 京都大学, 農学研究科, 助教授 (90209776)
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| Keywords | 植物ウイルス / シロイヌナズナ / ブロモウイルス / 突然変異体 / 宿主因子 / 複製 / 翻訳 / クローニング |
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| Research Abstract |
本研究では、Brome mosaic virus(BMV)が非宿主シロイヌナズナのcpr5変異体に感染する現象に関与する宿主因子とウイルス因子の同定、およびSpring beauty latent virus(SBLV)増殖の遅延する変異体シロイヌナズナの性状解析と原因遺伝子のクローニングを試みている。1)BMVのcpr5変異体感染に関与する宿主因子を同定する試みの一環として、cpr5変異体以外にBMV感染を許容する変異体をアクティベーションタグラインを利用してスクリーニングできる系を構築した。また、CPR5遺伝子がBMV感染に対して阻害的に機能している可能性を検証するため、Agrobacteriumを用いたタバコ葉におけるトランジエントアッセイを行ったところ、一細胞レベルでBMVの増殖を若干抑制することが分かった。2)BMVはCol-0細胞よりもcpr5細胞において、効率良く増殖する。BMVの複製酵素成分を一過的に発現させ、ゲノムRNA複製の違いを両細胞間で比較した結果、大きな差異は認められなかった。複製酵素成分を発現するゲノムRNA1とRNA2にルシフェラーゼマーカー遺伝子を挿入あるいは置換したコンストラクトを構築し、翻訳活性の違いを検出できる系を構築した。これまで用いてきたBMV-M1系統と異なり、M2系統やPV180系統はCol-0細胞においても高い蓄積を示す。この現象には、M2系統やPV180系統のRNA2の3'非翻訳領域が関与していることが示唆された。3)SBLVの感染の遅延するCol-0変異体2433Bにおける他属のウイルスの感染性を調査した結果、トバモウイルスではむしろ感染の促進が認められた。変異体2433Bにおける原因遺伝子を単離するため、ポジショナルクローニングを進めた。
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