2006 Fiscal Year Annual Research Report
アレルギー治療における抗原特異的ワクチン開発の研究
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17380184
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
阪口 雅弘 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任助教授 (20170590)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
増田 健一 独立行政法人理化学研究所, ワクチンデザイン研究チーム, 研究員 (40313077)
蔵田 圭吾 独立行政法人理化学研究所, ワクチンデザイン研究チーム, 研究員 (50391941)
辻本 元 東京大学, 大学院農学生命科学研究科, 教授 (60163804)
五十君 靜信 国立医薬品食品衛生研究所, 食品衛生管理部, 室長 (70212743)
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| Keywords | アレルギー / 乳酸菌 / スギ花粉 / アレルゲン / LLO |
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| Research Abstract |
犬においてアレルギー疾患が多く報告されている。その中でもスギ花粉症の犬はアレルギー全体の10%程度を占め、ダニアレルギーに次いで重要なアレルギー疾患である。アレルギー治療研究の分野において乳酸菌が注目され、乳酸菌におけるTh1誘導能およびIgE産生抑制効果が示されている。
本研究においてスギ花粉症に対する抗原特異的な免疫療法として、スギ花粉アレルゲン遺伝子組換え乳酸菌を用いたワクチン開発を目的としている。ベクターとして、乳酸菌:Lactobacillus casei(ATCC393)を用いた。L.caseiにおける発現に成功しているLLOとの融合タンパクとして発現されるようにデザインしたプラスミドベクターを作製し、L.caseiに導入した。本研究では、N末端から158-329番目のアミノ酸を含むスギ花粉アレルゲンであるCry j 1(Cry j 1_<158-329>;約20kDa)を用いた。このCry j 1はヒトおよびBALB/cマウスのCD4+ T細胞が認識するT細胞エピトープを含んでいる。LLOは、Listeria monocytonegesの菌体由来タンパクであり、LLO自体にマウスの脾臓細胞からTh1サイトカインを誘導することが明らかとなっている。LLOは溶血毒性を有するため、本研究では、溶血毒性をもたらすドメインを欠損させた変異LLOを用いた。
抗LLO抗体を用いたウェスタンブロット法では、Cry j 1_<158-329>-LLO導入株で約60kDaのバンドを、LLO導入株では約40kDaのバンドを検出した。この分子量の違いはCry j 1_<158-329>(20kDa)の分子量と一致することから、導入したCry j 1_<158-329>は発現していると予想される。また、LLOからCry j 1_<158-329>にわたるシークエンスを増幅するようにデザインされたプライマーペアを用いたRT-PCRによって、Cry j 1_<158-329> mRNAの発現も確認した。これらの結果は、この組換えL.caseiにおけるCry j 1_<158-329>の発現を示している。このリコンビナント乳酸菌によるIL-12 p70誘導能をBALB/cマウスの脾臓細胞で検討した結果、LLOの発現によってIL-12の産生が増強されることが明らかになった。
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