2006 Fiscal Year Annual Research Report
肥満細胞による抗原特異的抗体産生の臨床的意義に関する研究
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17380189
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
増田 健一 独立行政法人理化学研究所, ワクチンデザイン研究チーム, 研究員 (40313077)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
阪口 雅弘 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任助教授 (20170590)
辻本 元 東京大学, 大学院農学生命科学研究科, 教授 (60163804)
松田 浩珍 東京農工大学, 大学院共生科学技術研究部, 教授 (80145820)
蔵田 圭吾 独立行政法人理化学研究所, ワクチンデザイン研究チーム, 研究員 (50391941)
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| Keywords | IgE / 肥満細胞 / 抗体産生 / イヌ / アナフィラキシー |
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| Research Abstract |
マウス骨髄由来培養肥満細胞において抗体産生条件を検討したところ、IL-4およびレチノイン酸で刺激するとフローサイトメトリーで確認できるIgE産生が認められることがわかった。さらに、これら細胞からゲノムを抽出し、DC-PCR法を用いて抗体遺伝子の再構成について検討したところ、IL-4刺激下においてのみそれらが認められることがわかった。さらにマウスIgE H鎖をコードするプライマー設定によるRT-PCR法によってそのmRNA発現を確認し、それはさらに増幅したマウスIgE H鎖のPCR産物を用いたin situハイブリダイゼーションによっても確認することができた。しかし、抗IgE抗体を用いた脱顆粒試験ではこれら肥満細胞では脱顆粒は起こさないことがわかり、これらIgE発現がH鎖のみである事が示唆された。
一方、肥満細胞の抗体産生によるアナフィラキシーショックの有無について検討を行った。CpG-Cry j1によって治療したマウスに尾静脈からCry j1をボ-ラス注射した後、直腸温を測定した結果、IgE上昇が低いマウスにおいても直腸温の低下が認められ、アナフィラキシー・ショックが誘導されることがわかった。血清IgE値の高低に関与しないアナフィラキシー惹起経路があることが示唆された。また、犬の肥満細胞腫より肥満細胞株を樹立し、その性状について検討を行った。その結果、c-kitの活性化の有無によって2種類の細胞株を取得した。これら細胞株よりmRNAを抽出し、リアルタイムPCRによってイヌIgEH鎖を検出するようにプライマーを設定し、リアルタイムPCR法を用いてIgEmRNA発現について検討を行った。しかし、いずれの細胞株においてもIgE mRNA発現は認められなかった。
臨床的な検討を行うために、イヌのアレルギー性疾患においてIgEが関与する症例の選択を行った。これら症例においては、牛血清中成分に反応するIgEが検出され、アレルギー症状にIgEが関与している可能性が示唆された。これらの症例の皮膚より肥満細胞を抽出し、それらがIgE産生に関与しているかどうかについて今後検討する必要があると思われた。
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