アンジオテンシン受容体シグナルクロストークのプロテオームの解析

2007 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 17390068
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 岩尾 洋 Osaka City University, 大学院・医学研究科, 教授 (00137192)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 泉 安雄 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (10347495) ; 中尾 隆文 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (50326261) ; 塩田 正之 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 助教 (30381990)
• Keywords: シグナル伝達 / 循環器・高血圧 / アンジオテンシンII / プロテオーム / 薬理学

Research Abstract

(1)in vitro解析
野生型ラット胸部大動脈由来血管内皮細胞にAkt-strepを一過性に遺伝子導入し、アンジオテンシンII、アンジオテンシンII受容体拮抗薬、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬で10分から30分間、刺激を加えた。strepアフィニティー精製、二次元電気泳動、銀染色の結果、Aktl結合分子の変化を観察した。中でもアンジオテンシン変換酵素阻害薬は他にはない変化を認めた。これらを質量分析により同定したところ、その大半は骨格系分子、酵素、分子シャペロンであった。うち、5種類の分子に関して内因性の結合を免疫沈降法によって観察した(J Pharmacol Sci, in press)。またこのうちHsp70はAktに恒常的に結合し、Aktの活性制御を行うことで内皮機能を制御していることが明らかになった(投稿準備中)。
(2)in vivo解析
ラットの頚動脈を結さつすることで一時的に血流を遮断し、組換えアデノウイルスによる遺伝子導入を行った。まずlacZ、EGFP組換えアデノウイルスのよる遺伝子導入効率を試みた結果、遺伝子導入を確認した。そこでAkt組換えアデノウイルスによる遺伝子導入を行ったが、得られる総タンパク量が少なくstrepアフィニティー精製、質量分析を行うために十分なタンパク量が得られないことがわかった。よって頚動脈を標的としたin vivoの解析を中断し、下肢虚血モデルにおける血管新生の際のAkt結合分子の探索を行うこととした。その結果、in vitroと重複するいくつかの分子を同定した。本解析は現在さらに進行中である。

Research Products

• [Journal Article] PI3K/Akt/FOXO3a pathway contributes to thrombopoietin-induced proliferation of primary megakaryocytes in vitro and in vivo via modulation of p27(Kip1). (2008)
  • Author(s): Nakao, T., Geddis, A.E., Fox, N.E., and Kaushansky, K.
  • Journal Title: Cell Cycle 7 Pages: 257-266
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Cobalt Protoporphyrin Attenuates Rat Obstructive Nephropathy:Role of Cellular Infiltration. (2008)
  • Author(s): Iwai, T., Kitamoto, K., Teramoto, K., Machida, Y., Tamada, S., Yukimura, T., Iwao, H., Nakatani, T., and Miura, K.
  • Journal Title: Urology. (in press)
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Microarray analysis of glomerular gene expression in murinelupus nephritis. (2008)
  • Author(s): Teramoto, K., Negoro, N., Kitamoto, K., Iwai, T., Iwao, H., Okamura, M., and Miura, K.
  • Journal Title: J Pharmaeol Sci 106 Pages: 56-67
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Interleukin-10 gene transfer to peritoneal mesothelial cells suppresses peritoneal dissemination of gastric cancer cells due to a persistently high concentration in the peritoneal cavity. (2008)
  • Author(s): Tanaka, F., Tominaga, K., Shiota, M., Ochi, M., Kuwamura, H., Tanigawa, T., Watanabe, T., Fujiwara, Y., Oshitani, N., Higuchi, K., Iwao, H., and Arakawa, T.
  • Journal Title: Cancer Gene Ther 15 Pages: 51-59
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Protein phosphatase 4 catalytic subunit regulates Cdk1 activity and microtubule organization via NDEL1 dephosphorylation. (2008)
  • Author(s): Toyo-oka, K., Mori, D., Yano, Y., Shiota, M., Iwao, H., Goto, H., Inagaki, M., Hiraiwa, N., Muramatsu, M., Wynshaw-Boris, A., Yoshiki, A., and Hirotsune, S.
  • Journal Title: J Cell Biol 180 Pages: 1133-1147
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Left ventricular volume and function in cynomolgus monkeys using real-time three-dimensional echocardiography. (2007)
  • Author(s): Tsusaki, H., Yonamine, H., Tamai, A., Shimomoto, M., Kuwano, K., Iwao, H., Nagata, R., and Kito, G.
  • Journal Title: J Med Primatol 36 Pages: 39-46
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pravastatin induces rat aortic endothelial cell proliferation and migration via activation of PI3K/Akt/mTOR/p70 S6 kinase signaling. (2007)
  • Author(s): Nakao, T, Shiota, M., Tatemoto, Y., Izumi, Y., and Iwao, H.
  • Journal Title: J Pharmaeol Sci 105 Pages: 334-341
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Growth inhibition of colon cancer cells by transfection of dominant-negative apoptosis signal-regulating kinase-1. (2007)
  • Author(s): Kuwamura, H., Tominaga, K., Shiota, M., Ashida, R., Nakao, T., Sasaki, E., Watanabe, T., Fujiwara, Y., Oshitani, N., Higuchi, K., Ichijo, H., Arakawa, T., and Iwao, H.
  • Journal Title: Oncol Rep 17 Pages: 781-786
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Menage-a-trois 1 is critical for the transcriptional function of PPARgamma coactivator 1. (2007)
  • Author(s): Sano, M., Izumi, Y., Helenius, K., Asakura, M., Rossi, D.J., Xie, M., Taffet, G., Hu, L., Pautler, R.G., Wilson, C, R., Boudina, S., Abel, E.D., Taegtmeyer, H., Scaglia, F., Graham, B.H., Kralli, A., Shimizu, N., Tanaka, H., Makela, T.P., and Schneider, M.D.
  • Journal Title: Cell Metab 5 Pages: 129-142
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The long-acting Ca2+-channel blocker azelnidipine prevents left ventricular remodeling after myocardial infarction. (2007)
  • Author(s): Nishiya, D., Enomoto, S., Omura, T., Matsumoto, R., Kusuyama, T., Izumi, Y., Iwao, H., Takeuchi, K., and Yoshiyama, M.
  • Journal Title: J Pharmacol Sci 103 Pages: 391-397
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Hsp70はAktの活性を制御し、血管新生に関与する (2008)
  • Author(s): 日下部 裕美、塩田 正之、疋田 優子、泉 康雄、中尾 隆文、三浦 克之、岩尾 洋
  • Organizer: 第81回薬理学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2008-03-19
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] FGF-2はプラバスタチンが誘導する血管新生に関与する (2008)
  • Author(s): 疋田 優子、塩田 正之、日下部 裕美、泉康 雄、中尾 隆文、三浦 克之、岩尾 洋
  • Organizer: 第81回薬理学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2008-03-19
• [Presentation] Menage-a-trois1は心筋代謝機能の維持に重要である (2008)
  • Author(s): 泉 康雄、佐野 元明、塩田 正之、中尾 隆文、岩尾 洋
  • Organizer: 第37回心脈管作動物質学会
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2008-02-02
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] Menage-a-trois1は心筋の代謝機能保持に不可欠である (2007)
  • Author(s): 泉 康雄、塩田 正之、中尾 隆文、岩尾 洋
  • Organizer: 第17回循環薬理学会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2007-11-30
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] スタチンの多面的作用発現の分子機序の解析 (2007)
  • Author(s): 塩田 正之、日下部 裕美、疋田 優子、中尾 隆文、泉 康雄、岩尾 洋
  • Organizer: 第112回薬理学会近畿部会
  • Place of Presentation: 大阪
  • Year and Date: 2007-11-16
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] Menage-a-trois1は心筋のミトコンドリア機能に不可欠である (2007)
  • Author(s): 泉 康雄、岩尾 洋
  • Organizer: 第11回心血管内分泌代謝学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2007-11-16
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] 心臓特異的なMAT1遺伝子欠失マウスは劇的な心不全を引き起こす (2007)
  • Author(s): 泉 康雄、塩田 正之、三浦 克之、岩尾 洋
  • Organizer: 第30回日本高血圧学会
  • Place of Presentation: 沖縄
  • Year and Date: 2007-10-25
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] プラバスタチン依存的FGF-2発現は血管新生に関与する (2007)
  • Author(s): 疋田 優子、塩田 正之、日下部 裕美、泉 康雄、岩尾 洋
  • Organizer: 第30回日本高血圧学会
  • Place of Presentation: 沖縄
  • Year and Date: 2007-10-25
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [Presentation] HSP70はスタチンによるAktの活性化を制御し、血管内皮細胞遊走および脈管形成に関与する (2007)
  • Author(s): 日下部 裕美、塩田 正之、疋田 優子、泉 康雄、岩尾 洋
  • Organizer: 第30回日本高血圧学会
  • Place of Presentation: 沖縄
  • Year and Date: 2007-10-25
• [Presentation] プラバスタチンはラット大動脈血管内皮細胞においてFGF-2の産生を増加させる (2007)
  • Author(s): 疋田 優子、塩田 正之、日下部 裕美、泉康 雄、中尾 隆文、岩尾 洋
  • Organizer: 第111回薬理学会近畿部会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2007-06-15