2005 Fiscal Year Annual Research Report
肥満細胞由来キマーゼの新展開-血管新生と腫瘍におけるキマーゼの役割-
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17390070
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| Research Institution | Osaka Medical College |
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Principal Investigator |
宮崎 瑞夫 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10047186)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高井 真司 大阪医科大学, 医学部, 助教授 (80288703)
金 徳男 大阪医科大学, 医学部, 講師 (90319533)
村松 理子 大阪医科大学, 医学部, 助手 (30330096)
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| Keywords | 肥満細胞 / キマーゼ / 血管新生 / 腫瘍 / Vascular Endothelial Growth Factor(VEGF) / マトリックスメタロプロテイネース(MMP)-2 |
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| Research Abstract |
本年度は、in vitroの実験として、ヒト血管内皮チューブ形成キットを用いてヒトキマーゼのチューブ形成における役割を明らかにした。また、in vivoの実験として、ハムスター下肢虚血モデルを解析するとともに精製キマーゼによる血管新生促進効果を確認した。上記2実験を行うため、ヒトキマーゼおよびハムスターキマーゼの精製は、ヒト血管組織およびハムスター頬袋からヘパリンアフィニティーカラムとゲル濾過カラムを用いて行った。
ヒト血管内皮チューブ形成キットを用いてヒトキマーゼを投与したところ、単独では、ほとんどチューブ形成の促進作用は認められなかった。しかし、Vascular Endothelial Growth Factor(VEGF)の存在下では、キマーゼは、有意にチューブ形成を促進させた。キマーゼ添加した直後、培養上清のマトリックスメタロプロテイネース(MMP)-2の活性が有意に増加していたことより、キマーゼは、MMP-2の活性化を介して血管新生促進に寄与したことが示唆された。
BioF1Bハムスターに麻酔下、下肢血管を結紮する血管新生モデルを作製した。ハムスター下肢結紮モデルは、麻酔下、下肢を結紮し、1週毎に精製ハムスターキマーゼまたは溶媒を局所に1回注射し結紮直後、結紮後1週、2週、4週、8週の時点で、麻酔し、下肢結紮末梢部位をレーザードップラー血流画像化装置にて計測した。その後、下肢結紮末梢部位を摘出し、組織学的解析、生化学的解析を行った。その結果、キマーゼ投与群では、有意に下肢血流を増大させ、組織学的解析結果より、血管新生数の有意な増加も確認できた。
これらの実験結果は、キマーゼが、アンジオテンシンIIの産生以外にMMP-2の活性化を介して血管新生を促進させることを明らかにしたものであり、キマーゼによる血管新生療法の可能性を示唆するものである。
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