2006 Fiscal Year Annual Research Report

炎症性腸疾患局所からの抗体ライブラリーの作製と対応抗原の解析・応用

Research Project

Project/Area Number	17390106
Research Institution	FUJITA HEALTH UNIVERSITY
Principal Investigator	堤寛藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (80138643)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	鴨志田伸吾藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70351020) 下村龍一藤田保健衛生大学, 医学部, 助手 (20360232) 長坂光夫藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70410701) 黒澤良和藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (10109259) 三浦惠二藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (20199946)
Keywords	炎症性腸疾患 / 潰瘍性大腸炎 / クローン病 / 病変特異的抗体 / 抗体産生細胞 / 病変局所 / クラーナリティ / 抗体mRNA
Research Abstract	本研究の目的は、炎症性腸疾患(クローン病・潰瘍性大腸炎)の病変局所で産生される抗体を解析して、疾患の解析・診断・治療に有用な抗体を見つけ出すことである。炎症性腸疾患の病変局所には多数の形質細胞が認められ、病変局所に浸潤することから、疾患に関連した抗体を産生しているものと思われる。そこで、病変部で特異的に産生される抗体mRNAをもとに抗体分子を調製して、対応抗原を解析するアプローチを計画した。昨年度の検討から、炎症性腸疾患モデルマウスの病変大腸粘膜では、抗体cDNAにクローナリティが認められた。これは特異的な抗原刺激により、それに対応する抗体が、特異的に産生されている結果であると推測された。つまり、クローナリティを識別基準とした病変特異的な抗体のスクリーニング法の可能性が示された。本年度は、horseradish peroxidase (HRP)で免疫したラットの膝窩リンパ節の抗体cDNAを対象にクローナリティのある抗体cDNAを検索して、そのcDNAから調製したscFv型抗体が、HRP特異性を示すかを検討した。その結果、抗体H鎖、L鎖ともにクローナリティが認められた。しかし、クローナリティのある抗体cDNAからscFv型抗体を調製して、HRPに対するELISAを行った結果、これらのscFv型抗体はHRPに反応しなかった。さらに、リンパ節由来の抗体cDNAライブラリーから、抗HRP抗体をスクリーニングした結果、1種類の抗体が分離された。そのH鎖はクローナリティのあるクローンの1つと同じであったが、L鎖はクローナリティのないクローンと同じであった。これらのことから、病変局所でクローナリティを示す抗体cDNAは、必ずしも病変特異的な抗原に対する抗体をコードしているわけではないことが判明した。