2005 Fiscal Year Annual Research Report
発達期大脳皮質神経細胞の垂直移動・分化関連遺伝子の網羅的同定及び解析
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17500207
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
井上 浩一 浜松医科大学, 医学部, 助手 (80345818)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
福田 敦夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
窪田 寿彦 浜松医科大学, 医学部, 助手 (80377746)
熊田 竜郎 浜松医科大学, 医学部, 助手 (00402339)
古川 智範 浜松医科大学, 医学部, リサーチアシスタント (60402369)
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| Keywords | 発達 / 脳 / 移動 / マイクロアレイ / cell sorting / 神経 |
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| Research Abstract |
胎生13日齢のICRマウス胎仔の脳室内にEGFP遺伝子を発現するプラスミドを注入し、子宮内電気穿孔法を用いて脳室周囲の神経前駆細胞にEGFPを発現させた。それらの細胞は徐々に脳表に移動していくが、遺伝子導入3日後(胎生16日)頃ではEGFP陽性細胞は脳室帯、中間帯、辺縁帯にほぼ均等に分散している。そこで、胎生15日の脳室帯、胎生16日の中間帯、胎生18日の辺縁帯を脳スライスから切り出し、パパインなどを用いて細胞を分させた後、cell sortingによりEGFP陽性細胞のみを回収した。それぞれの部位での細胞するはそれぞれ1.4X10^5、1.8X10^5、2.6X10^4であった。細胞数が不十分であったため、in vitro転写法により、2段階でRNAを増幅し、マイクロアレイを行った。マイクロアレイに関しては、当時本学に設備がなかったため、専門業者に依頼した。その結果、数多くの遺伝子が発達とともにその発現が上昇、または、減少していた。特記すべき事としては、細胞の垂直方向への移動と関係が示唆される遺伝子として、シグナル強度が十分で、かつ、胎生16日中間帯で3倍以上発現が上昇しその後減少する遺伝子が5つ認められた。その内訳は、未知の遺伝子が3種と既知の遺伝子が2種であった。それら5種の遺伝子について、上記スクリーニング時と同様の方法で取得したRNAをテンプレートにし、RT-PCRを行ってその発現レベルの変化を確認を行っている。
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Research Products
(2 results)
