2006 Fiscal Year Annual Research Report
PCBによる脳発達障害におけるPCB反応性甲状腺ホルモン受容体結合蛋白の役割
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17510039
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
岩崎 俊晴 群馬大学, 大学院医学系研究科, 講師 (80375576)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鯉淵 典之 群馬大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80234681)
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| Keywords | PCB / 転写調節 / 胎児脳 / コリプレッサー / 甲状腺ホルモン受容体 / Sos-Ras Yeast Two-hybrid法 |
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| Research Abstract |
#1近年我々は、PCBが甲状腺ホルモン(TH,T3)受容体(TR)を介する転写系に作用し、低濃度(10^<-10>M)でT3により活性化された転写を抑制し、その機序は標的遺伝子プロモーター領域からTRが部分的に解離するためであることを明らかにした。従来、in vitroでのTRとDNAの結合はGel Shift法により証明されてきたが、放射性同位元素(RI)を使用する上、時間が48時間程度かかり、多検体のスクリーニング法として適さない。そこで非RI物質でDNAを標識した新たなスクリーニング法を考案した(Liquid nuorescent DNA pull down assay ; LFDPD特許出願2006-064876)。この方法により結果が3-4時間で得られ、RIを使わずに、排出物を90%以上削減することができた。
#2 PCBのTRへの作用部位を解明するために、TR及び、glucocorticoid受容体(GR)のN末端、DNA結合領域(DBD)、LBDを組み合わせて作成したキメラ受容体を用いて、レポーターアッセイを行った。TRのDBDからLBDにかけての比較的広い領域にPCBが作用することが示唆された。Gel Shift法及び、LFDPDを用いても一致する結果を得た。
#3 PCBより毒性が強いとされるダイオキシンについてTRの転写系に対する影響を調べたが、ほとんど認められなかった。
#4 酵母膜蛋白を用いた新たな同定法であるSos-Ras Yeast Two-hybrid法を用いて胎児脳cDNAライブラリーより新たな核内蛋白を同定した。この蛋白は、ノーザンブロット法により広範囲に発現しており、転写コリプレッサーとして機能することが明らかとなった。
#5 本申請で購入した倒立型顕微鏡の設定及び、予備実験が完了した。
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