2006 Fiscal Year Annual Research Report
コフィリンによるアクチン骨格ダイナミクスの制御機構の解明
Project/Area Number |
17570152
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Research Institution | Tohoku University |
Principal Investigator |
大橋 一正 東北大学, 大学院生命科学研究科, 助教授 (10312539)
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Keywords | アクチン骨格 / コフィリン / LIMキナーゼ / Slingshot / GFP / リン酸化 / 阻害剤 |
Research Abstract |
アクチン線維の切断・脱重合因子であるコフィリンは、アクチン骨格の再構築を司る最も重要な制御因子の一つであり、LIMキナーゼとSlingshotによるリン酸化・脱リン酸化によってアクチンとの結合が制御されている。私たちは、これまでに、LIMキナーゼとSlingshotが細胞運動、極性形成、神経突起伸展・退縮に重要な働きを持つことを明らかにしてきた。さらに、細胞運動時のアクチン骨格の再構築に対するコフィリンの活性制御の役割を明らかにするために、分割GFPを用いてコフィリンとアクチンの結合を検出するプローブの作製を進めてきた。その結果、不可逆的ではあるがコフィリンとアクチンの結合に依存して蛍光発色する分割GFPプローブを作製することが出来た。このプローブを昆虫細胞に発現させて大量精製し、LIMキナーゼとSlingshotの活性をGFPの発色を指標としてin vitroで高感度に測定する方法を作製し、LIMキナーゼとSlingshotの阻害剤のハイスループットスクリーニング法を確立した。これを用いて、既存のキナーゼ阻害剤や化合物を数百種類用いてLIMキナーゼとSlingshotの阻害剤のスクリーニングを行った。その結果、細胞内チロシンキナーゼであるSrcファミリーに対する特定の2種類の阻害剤がLIMキナーゼに対しても作用することを発見した。これらの阻害剤が、LIMキナーゼの過剰発現による細胞内のアクチン過重合を解除すること確認した。また、その一つはLIMキナーゼに作用する濃度で細胞運動や神経突起伸展に阻害効果を示すことが報告されている。この阻害剤を用いることで、アクチン骨格再構築におけるコフィリンのリン酸化の役割が詳細に解析できると考えている。さらに、これらの阻害剤の誘導体の中でLIMキナーゼに特異性の高いものを探索し、癌転移や炎症の抑制剤のシーズとなる化合物の発見を進めている。
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