2007 Fiscal Year Annual Research Report
N-ニトロソ化合物による肝障害機構の解明:一酸化窒素と活性酸素の役割
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17590028
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
奥田 晴宏 National Institute of Health Sciences, 有機化学部, 部長 (30160807)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
福原 潔 国立医薬品食品衛生研究所, 有機化学部第一室, 室長 (70189968)
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| Keywords | N-ニトロソ化合物 / N-ニトロソフェンフルラミン / フェンフルラミン / アルキルアミン / 活性酸素 / 酸化ストレス |
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| Research Abstract |
本研究ではN-ニトロソ化合物による肝障害への活性酸素毒性の関与を明らかにすることを目的として、N-ニトロソフェンフルラミン(NO-fen)の毒性発現機構について検討を行っている。近年、中国からダイエットを目的として輸入された未承認医薬品および健康食品による重篤な肝障害が大きな話題となった。これらの成分として食欲減退作用を示すフェンフルラミン(fen)の代わりに含まれていたのがNO-fenである。我々は本研究で、1)NO-fenはCu(II)存在下、活性酸素を発生しpBR322DNAに対して強力な切断活性を示すこと、また、このDNA切断反応はfenでは進行しないことから、N-ニトロソ構造を有するNO-fenに特徴的であること、2)ESRによって活性酸素種を解析した結果、NO-fenはCu(II)の一電子還元反応を経由して酸素を還元活性化し、ヒドロキシルラジカル様活性酸素として銅結合型の活性酸素(Cu(I)-00H)を発生すること、また、その過程で一酸化窒素も発生することを明らかにした。今年度はNO-fenによる活性酸素毒性を動物レベルで明らかにすることを目的として、NO-fenを投与したラットの肝臓について活性酸素障害のマーカーである8-OHdG量を測定した。NO-fenを70mg/kg投与したラットの肝臓と非投与ラットの肝臓からDNA抽出を行った。そして、NucleaseP1およびアルカリフォスファターゼ処理をしたサンプルについて、電気化学的検出器によるHPLC法で8-OHdGを定量した。肝障害の過程で活性酸素が発生すると8-OHdG量の増加が予測されるが、今回NO-fenを投与したラット肝からは8-OHdG量の増加はみられなかった。おそらくNO-fenの投与量が少なかったことが原因と思われる。以上、我々は肝障害物質NO-fenからの活性酸素毒性について検討を行い、DNA切断活性およびその反応機構を明らかにした。しかしながらNO-fenを投与したラット肝臓から活性酸素毒性を検証することはできなかった。今後は動物実験について投与計画の再検討等をおこなうとともに、ヒトへの毒性が問題となっている他のNO化合物についても活性酸素毒性について検討をおこなう予定である。
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