2005 Fiscal Year Annual Research Report

バナジウムによるp53活性化機構とその毒性学的意義

Research Project

Project/Area Number	17590526
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Research Institution	Tokyo Women's Medical University
Principal Investigator	松岡雅人東京女子医科大学, 医学部, 教授 (50209516)
Keywords	バナジウム / カドミウム / p53 / リン酸化 / シグナル伝達 / MAPキナーゼ
Research Abstract	1 メタバナジン酸ナトリウム(100μM)を48時間暴露したA549ヒト肺胞上皮細胞の抽出液から、p53蛋白を免疫沈降し、各セリン残基(セリン6、9、15、20、37、46、392)のリン酸化を特異的リン酸化認識抗体を用いたウェスタンブロット法にて検出した結果、セリン15部位のリン酸化が最も顕著であった。 2 A549細胞におけるメタバナジン酸ナトリウム暴露によるセリン15残基リン酸化型p53蛋白の蓄積は、濃度(10-200μM)および暴露時間(8-48時間)依存性に認められた。 3 DNA-PKおよびATMの阻害剤であるwortmanninの処置により、メタバナジン酸ナトリウム暴露によるp53蛋白セリン15残基のリン酸化が抑制された。一方、PI3K阻害剤のLY294002、MAPキナーゼ経路阻害剤であるU0126およびSB203580の処置では、p53蛋白のリン酸化抑制は認められなかった。p53蛋白セリン15残基リン酸化に至るシグナル伝達経路として、DNA-PKおよびATMの関与が考えられた。 4 オルトバナジン酸ナトリウムおよびメタバナジン酸アンモニウムの暴露(100μM、48時間)でも、A549細胞においてセリン15残基リン酸化型p53蛋白の蓄積を認めた。 5 代表的な神経毒性物質であるアクリルアミド暴露により、SH-SY5Yヒト神経芽細胞腫において、A549細胞におけるバナジウム暴露と同様なp53蛋白セリン15残基のリン酸化を認めた。今後、A549細胞において、wortmanninの処置、およびp53蛋白セリン15残基のセリン→アラニン置換を行い、バナジウムによるセリン15残基リン酸化とp53転写活性化との関連性をレポータージーンアッセイを用いて検討する。また、バナジウム暴露によるp53蛋白リン酸化に及ぼす活性酸素の影響を検討する。