2006 Fiscal Year Annual Research Report
GLUT4結合アンキリン構造蛋白によるインスリン依存性糖取り込み促進機構の解析
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17590935
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
奥屋 茂 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (20214083)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松原 淳 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (40311815)
鶴 政俊 山口大学, 医学部附属病院, 助手 (20379960)
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| Keywords | GLUT4 / トランスロケーション / リサイクリング / アダプター蛋白 / アンキリン構造 / 糖取り込み / インスリン / 脂肪細胞 |
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| Research Abstract |
GLUT4のリサイクリングやインスリン依存性トランスロケーションの制御に、GLUT4結合蛋白が重要な役割をはたすと想定されている。この蛋白を同定する目的で、GLUT4をbaitにtwo-hybrid法により脂肪細胞cDNAライブラリーのスクリーニングを行い、蛋白-蛋白結合に関与するとされる"アンキリン構造"と複数のリン酸化想定部位をもつ新規蛋白p61のクローニングに成功した。3T3-Ll脂肪細胞にp61を過剰発現させると、インスリン依存性糖取り込みならびにGLUT4トランスロケーションが促進する結果を得た。そこでさらにp61の機能解析を進めてきた。
1.抗体作製:モルモット免疫で抗血清を作製後精製し、強制発現p61を認識することをウエスタンで確認し、脂肪細胞内在性p61に関しても予想サイズのバンドとして検出し得た。
2.p61ノックダウンによる糖輸送活性への影響:アデノウイルスベクターでshort hairpin RNAを導入することでp61をノックダウンした3T3-L1脂肪細胞を作製した。p61をノックダウンすることで、インスリン依存性のGLUT4トランスロケーションは抑制され、糖取り込みも抑制される傾向にあった。
3.P61の細胞内局在:固定・免疫染色後の3T3-L1脂肪細胞を共焦点顕微鏡で観察した結果、脂肪細胞内でp61はGLUT4と同様に細胞質内に存在し、部分的には共存する可能性が示唆された。一方、インスリン刺激下で、その局在に明らかな変化は認められなかった。
これらの検討で、p61蛋白はインスリン依存性に細胞内局在変化を起こす可能性は低く、一方GLUT4のトランスロケーションに影響することで、糖取り込みに関与する可能性が示唆された。
これらの結果は、平成19年度日本糖尿病学会年次学術集会において発表予定である。さらに、今後の論文投稿へと準備を進めている。
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