2005 Fiscal Year Annual Research Report
骨髄腫細胞のIL-6依存性増殖調節に関与するCD45分子の脂質ラフト移行の機序
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17591000
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
津山 尚宏 山口大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (10335747)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石川 秀明 山口大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (40294623)
小幡 雅則 山口大学, 医学部, 講師 (80158831)
河野 道生 山口大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40161343)
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| Keywords | シグナル伝達 / 骨髄腫 / IL-6 / CD45 / 脂質ラフト / Galectin-1 |
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| Research Abstract |
骨髄腫細胞のIL-6依存性増殖にはCD45分子の存在が必須であることを確認した。骨髄腫細胞は正常形質細胞と異なり、CD45アイソフォームの発現が骨髄腫細胞ではCD45RA-RB+RO+であり正常形質細胞ではCD45RA+RB+RO-であることを確認した。CD45RO+骨髄腫細胞株U266、CD45RA+B細胞株KUSを用いて、IL-6刺激後のCD45分子の膜上での動態を解析した。特に、脂質ラフト分画への移行を、1)ショ糖密度勾配法による分画とウエスタンブロット法、及び2)共焦点レーザー顕微鏡下での観察、とで検討した。IL-6刺激により、CD45RO分子は脂質ラフト分画に速やかに移動したが、CD45RA分子は移動しなかった。このことを更に確認するために、CD45陰性骨髄腫細胞株にGFPタグ化したCD45RA,CD45RBあるいはCD45ROを遺伝子導入した。それぞれをIL-6刺激後、それぞれのCD45アイソフォームの脂質ラフト分画への移動の有無を検討した。その結果、CD45RO分子が最も速やかに移行することが確認され、CD45RB分子も移行したがCD45RA分子は移行しなかった。脂質ラフト分画に移行したCD45RO分子において、細胞内領域に存在するフォスファターゼ活性がsrc型チロシンキナーゼであるLynの活性化に関与していることも確認した。次に、IL-6刺激により生じるCD45細胞内領域及びIL-6受容体との結合因子の探索を行っているが、今のところ明確な所見は得られていない。また、CD45分子と細胞外領域で結合しうるものとしてGalectin-1に注目し、Galectin-1がCD45RAには結合しうるがCD45ROには結合しないことを明らかにした。以上、本年度の研究成果から、CD45RO分子は骨髄腫細胞のIL-6依存性増殖に必須の分子であり、IL-6刺激により速やかに脂質ラフト分画へ移行し、src型チロシンキナーゼのLyn活性化を引き起こしていることが明らかになった。
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