2006 Fiscal Year Annual Research Report
神経芽腫におけるBMP応答性とDANおよびp53ファミリー遺伝子等の機能的役割
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17591128
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| Research Institution | Chiba Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
中村 洋子 千葉県がんセンター(研究所), 生化学研究部, 上席研究員 (60260254)
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| Keywords | 神経芽腫 / p53 / 細胞増殖抑制 / BMP |
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| Research Abstract |
目的:神経芽腫はp53遺伝子の変異がほとんど認められない腫瘍の一つである。しかし、最近の報告では、神経芽腫の約20%にp53の変異が存在することが判った。神経芽腫をBMP等で処理し、細胞死あるいは細胞増殖抑制が誘導されるか、それはp53に起因するか等は不明である。SK-N-ASの新しいp53の構造を見出しその機能解析を行った。
方法および結果:神経芽腫細胞株SH-SY5YおよびSK-N-ASを用いてシスプラチン処理による変化をMTTアッセイ法、TUNEL染色法およびFACScan法により検討したところ、SH-SY5Yはシスプラチン処理により細胞死が誘導されることが判ったが、SK-N-ASは細胞増殖抑制が認められた。次に、シスプラチン処理によるp53およびその下流遺伝子の解析を行った。SH-SY5Yはシスプラチン処理によりp53, p21^<WAF1>, Bax, PUMAの発現誘導、p53の15番目のセリンのリン酸化が認められたが、SK-N-ASはp21^<WAF1>の発現増加のみであった。SK-N-ASをBMP処理した場合も細胞死は認められず、細胞増殖抑制が誘導された。また、SK-N-ASは、野生型p53より分子量の小さなp53が主に細胞質に発現していることが判明した。SK-N-ASのp53の構造をRT-PCR法、PCR法およびアレーCGH法によって解析した。その結果、核移行配列を含むC末端のホモ欠失が示唆された。C末端欠失のp53を作成し、SK-N-ASに過剰発現させp53の細胞内局在性を検討した。導入された変異型p53は核には殆ど認められなかった。以上の結果から、SK-N-ASの新しいタイプのp53(ホモ欠失)を見出し、神経芽腫のp53ステイタスによりシスプラチンに対する反応性(細胞死あるいは細胞増殖抑制)が異なる可能性が示唆された。
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