• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2005 Fiscal Year Annual Research Report

分子生物学的手法を用いた抗癌剤感受性試験

Research Project

Project/Area Number 17591435
Research InstitutionKeio University

Principal Investigator

久保田 哲朗  慶應義塾大学, 医学部, 教授 (00118944)

Keywords化学療法 / 分子マーカー / ヒト胃癌細胞株 / ヌードマウス / 5-fluorouracil / cisplatin / mRNA / MTTアッセイ
Research Abstract

I.化学療法開始直後に反応する分子マーカーの抽出
化学療法開始早期に細胞死に先立ち変化を来たす遺伝子の候補としてgadd153 (DNA damage inducible gene),p21,c-junを採用した。in vitroではヒト胃癌細胞株TMK-1,MKN-45,MKN-74を,低濃度〜高濃度5-FU,CDDPにそれぞれ曝露後,real time RT-PCRを用いて経時的に各遺伝子のmessenger RNA (mRNA)の発現を定量した。抗腫瘍効果はMTT assayを用いて判定し、無治療群を対照群とし治療群との比を求めた。in vivoではヒト胃癌細胞株TMK-1をヌードマウス背部皮下に移植し腫瘍を作成した後,低容量〜高容量の5-FU,CDDPを腹腔内投与した。薬剤投与後48時間に皮下腫瘍を回収し,m-RNAを同様に定量した。また、それぞれの薬剤濃度による抗腫瘍効果は薬剤投与後21日目に評価した。
II.当院で手術施行される進行胃癌症例を対象として,検体の抗癌剤感受性とマイクロアレイによる遺伝子発現の相関を検討した。感受性試験に用いた薬剤はマイトマイシンCアドリアマイシン,シスプラチン(DDP),5-FUである。薬剤感受性は前項と同じく3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2Htetrazolium bromide (MTT)アッセイにより行った。
(1)RNAの抽出とcDNAの合成
RNA抽出に際しては,TRIZOLまたはSepasol-RNAI中に検体を加え,Polytronを用いて5秒間,15,000gで二回ホモジナイズした。クロロフォルムを添加し,15,000gで10分間遠沈し,RNAを含む液体を採取する。細胞の全RNAをイソプロパノールで沈降し,70%エタノールで洗浄し,DEPC処理水内に懸濁した。RNAを1.5unitのDNaseIで処理後,再度TRIZOL/クロロフォルムにより抽出し,エタノールで沈降し,DEPC処理水に溶解する。RNeasy Mini Kit (QIAGEN Hilden, Germany)を用いて,低分子のヌクレオチドを除去した。cDNAの合成はreverse Super Script Choice System (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)を用いて行う。cRNAはcDNAをテンプレートとして,MEGAscript T7 kit (Ambion, Austin, TX)を用いて合成した。

  • Research Products

    (6 results)

All 2005

All Journal Article (6 results)

  • [Journal Article] 薬剤感受性による胃癌化学療法の選択-現状と問題点-2005

    • Author(s)
      久保田哲朗
    • Journal Title

      胃と腸 40(7)

      Pages: 1023-1026

  • [Journal Article] 手術不能進行再発胃癌に対する化学療法2005

    • Author(s)
      久保田哲朗
    • Journal Title

      コンセンサス胃癌の治療.2005〜2007 4(2)

      Pages: 88-91

  • [Journal Article] 癌治療専門医制度を考える.日本癌治療学会2005

    • Author(s)
      久保田哲朗, 西山正彦, 吉野肇一
    • Journal Title

      癌の臨床 51(6)

      Pages: 421-426

  • [Journal Article] 特集;包括医療の導入による影響と対策、6.消化器外科領域における包括医療の影響と対策.2005

    • Author(s)
      久保田哲朗
    • Journal Title

      日本外科学会雑誌 106(10)

      Pages: 649-653

  • [Journal Article] テーラーメイドの胃癌化学療法2005

    • Author(s)
      久保田哲朗
    • Journal Title

      外科治療 93(5)

      Pages: 552-556

  • [Journal Article] 抗癌剤感受性と遺伝子多型2005

    • Author(s)
      久保田哲朗
    • Journal Title

      Bitoherapy 19(6)

      Pages: 471-476

URL: 

Published: 2007-04-02   Modified: 2016-04-21  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi