2005 Fiscal Year Annual Research Report
頸髄症モデルに対する神経栄養因子産生成体神経幹細胞の移植に関する研究
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17591514
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
三好 康之 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (00362997)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊達 勲 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (70236785)
杉生 憲志 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (40325105)
徳永 浩司 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (40294467)
小野田 惠介 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (20379837)
松井 利浩 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助手 (80362995)
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| Keywords | 頚髄症 / 神経幹細胞 / GDNF / アガロース / 成体 / アドノウイルス / ニューロン / グリオーシス |
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| Research Abstract |
頚髄症モデルラットの作製をめざして、麻酔下にて吸水性膨張樹脂であるアガロースビーズを硬膜外に挿入した。このビーズは水に浸した後約1日で最大膨張を得ることができる。ビーズ挿入後、1週間後に行動学的に評価したが(BBBスコアー)、行動学的にはほとんど変化を示さなかった。組織学的に脊髄を調べると、gliosisを認めるが脱髄性変化やニューロン変性は認められなかった。原因として、十分な圧迫が得ることができなかったと考え、現在、ビーズサイズを拡大したものを作成中である。
成体ラットの脳室下帯から神経幹細胞を採取し、EGF存在下で増殖させた。この細胞に対してアデノウイルスを用いてGDNF遺伝子を導入した。最大の導入効率とGDNF産生量を得るために、アドノウイルスの暴露時間およびウイルス数を検討し、これにより最もGDNFを産生する条件を得ることができた。この条件の下で、1.0x10^7の神経幹細胞から2〜10ng/dayのGDNFを産生させることが可能となった。また、GDNF遺伝子が導入された神経幹細胞は、分化条件下ではニューロン、アストロサイト、オリゴデンドロサイトに分化することができた。
この細胞を正常の脳内に移植し、持続的にGDNFを産生させることができるか検討した。線条体内に移植された神経幹細胞は、宿主脳全体にGDNFを供給することができ、移植した周囲の脳では、正常の組織に比べて約5倍の濃度のGDNFを供給することができた。この発現が少なくとも1ヶ月が持続していることを確認した。また、1ヶ月後に取り出された脳を免疫染色すると、移植した細胞は、ニューロンやグリアに分化していた。現在、脊髄内に移植し検討中である。
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